脓毒症动物模型制作及评价.docVIP

PAGE PAGE 1 脓毒症动物模型制作及评价 　　脓毒症动物模型是研究脓毒症发病机制和临床防治的基础。建立标准的符合临床的脓毒症动物模型是脓毒症研究领域重点课题之一［1］。本文就脓毒症动物模型制作中动物种类选择、制作方法等，予以综述并进行模型评价。 　　1脓毒症动物模型动物以及制作方法的选择 　　近交系小型动物如大鼠、小鼠或豚鼠，自身纯度较高、无特异性病原菌且价格较低。大型哺乳动物，如猪、羊、狗等动物，可进行血流动力学监测和提供充足标本，便于进行较长试验观察。灵长类动物免疫系统与人类高度相似，可用于评价炎性细胞因子以及免疫系统反应，但价格昂贵而且受到严格的伦理学制约。另外，动物自身特点也可供实验利用：如羊对内毒素敏感，只需相当于狗的几十至几千分之一剂量（0.6μg/kg）即可出现肺血管损伤等脓毒症症状［2］。猪肾脏、心血管和消化系统的生理特点和解剖结构与人类最相似，多用于严重脓毒症器官功能障碍的研究。具有明确基因特征动物如内毒素耐受型敏感型小鼠，成为从分子水平揭示脓毒症发病机制的重要工具［3］。 　　脓毒症动物模型使用的制作方法也是需要考虑的重要问题。不同种属宿主对内毒素或致病菌的敏感性、反应性各异：如啮齿类动物、猫和狗对内毒素具有一定的耐受性，而灵长类动物、兔和羊则对内毒素较敏感。即使是相同动物对不同细菌侵袭反应也不同：如腹腔注射金黄色葡萄球菌或大肠杆菌的小鼠，抗生素可诱发前者循环中肿瘤坏死因子α（TNF-α）的早期释放，而后者TNF-α释放在时间和变化幅度上均无明显影响。在应用抗TNF-α抗体分别对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌对感染的大鼠进行治疗时，结果显示对后者的保护作用优于前者［4］。即使是同一种动物同一种制模病原体，采取的攻击方式和剂量不同，所引起的动物体内细胞等炎性因子反应亦不同。如给予亚致死量的LPS可诱导动物产生高动力循环特点，而致死量LPS则使动物呈现低动力循环特点。所以脓毒症动物模型的选择，除了要考虑研究的目的以及路径之外，还要考虑制模所使用的方法以及在研究结果的解释方面考虑模型自身的特点以及局限，作出合理客观的解释。 　　2脓毒症动物模型的制模方法 　　为了能够系统性地研究机体遭遇感染性物质并且启动免疫系统引起的全身炎症反应综合征所包含的机制，就需要建立能够代表感染的动物实验模型，而且这样的模型应当在简化、标准、明确以及理想化的条件下建立［5］。 　　2.1细菌攻击的制模方法 　　此方法是在动物体内灌注单种或混合细菌以模拟人体受到细菌感染的临床情况。注射的途径有外周静脉或门静脉，腹腔注射以及经气管肺部灌注。在细菌种类的选择以及剂量上，不同的实验研究使用不尽相同，其中细菌种类的选择是重要的影响因素［6］。在一项以S.aureus对猪进行静脉注射感染制造脓毒症模型的研究中使用的S.aureus是致死剂量8×109cfu/kg，该剂量导致实验猪的存活时间是（27±5）h［7］。此种方法最早是在1988年Hinshaw等［8］研究应用。E.coli是经常使用的革兰氏阴性杆菌，在实际的应用中剂量选择差别较大，在Stephen等［9］进行的研究中所使用的E.coli菌血症动物模型，不同的实验组接受的细菌浓度不同：一组是108数量级，另外一组达到1010数量级，虽然前者平均存活时间约是后者的2.7倍，但两组实验动物猪在血流动力学结果具有一致性。 　　2.2内毒素攻击的制模方法 　　给动物静脉注射内毒素可诱导多种炎性介质的合成释放，并引起急性感染症状。根据攻击剂量此类模型大致可分为小剂量（亚致死量）、大剂量（致死量）和小剂量连续攻击3种。随着模型观察时间的延长，制作的脓毒症模型血细菌培养阳性率逐渐升高，提示该模型后期菌血症也发挥了重要的作用。在Maier等［10］的研究中，给予实验猪负荷剂量200μg的大肠杆菌LPS后然后以0.1μg/（kg?min）的速度进行持续静脉输注，该实验设计观察时间仅仅为3h，所有给予LPS注射的实验猪都存活至研究终点。而在另外一项使用LPS制作猪内毒素休克模型的研究中，为了研究LPS清除率对机体炎症因子的影响，所采用的注射方法是分别以不同的输注剂量以及速度进行制造LPS血症动物模型，而且其高低剂量的使用相差达到63.5倍（4μg/（kg?min）与0.063μg/（kg?min），其结果是模型所表现的脓毒症炎症反应轻重有所不同。而且在高剂量组出现了严重的平均动脉压接近肺动脉的血流动力学变化［11］。该模型制作成功标准多以平均动脉压的下降作为模型成功的标准［12-13］。 　　2.3腹膜炎攻击制模方法 　　2.3.1阑尾穿孔阑尾结扎穿孔是模拟人类阑尾炎或者憩室炎穿孔的病理变化造成混合性的细菌感染，制造的腹膜炎脓毒症动物模型曾一度被认为是研究脓毒症的金标准［6，14］。但Maier等［1