体液中常见酶及同工酶的生物化学检验.ppt

体液中常见酶及同工酶的生物化学检验 广州医学院医学检验系 临床生化教研室 前言 早在1900年，人们已发现脂肪酶活性升高对急性胰腺炎有特异的诊断价值；1908年，Wohlgemuth开始测定尿液中淀粉酶（AMY）以诊断急性胰腺炎。此后，学者们对血液中的重要代谢酶类与某些特定组织器官发生疾病的联系逐个地进行了研究，使得诊断酶学得到了重要的发展。 本节内容 一、丙氨酸氨基转移酶的测定 二、门冬氨酸氨基转移酶及其同工酶的测定 三、γ-谷氨酰基转移酶及其同工酶的测定 四、肌酸激酶及其同工酶测定 五、乳酸脱氢酶及其同工酶的测定 六、碱性磷酸酶及其同工酶的测定 七、酸性磷酸酶及其同工酶 八、淀粉酶酶及其同工酶的测定 九、脂肪酶 十、胆碱酯酶 一、丙氨酸氨基转移酶的测定 丙氨酸氨基转移酶（L-Alanine aminotransferse，ALT），俗称为谷丙转氨酶（GPT），广泛分布于全身各组织，尤其以肝脏中最丰富，且绝大多数存在于肝细胞的胞浆中。 主要催化丙氨酸和?-酮戊二酸之间的氨基转移反应。 ALT有两种不同活性的同工酶?（ALTs）和同工酶?（ALTm），分别存在于细胞质及线粒体，后者的活性为前者的16倍。肝细胞坏死血液中以ALTm为主。 （一）适应症 疾病的诊断和鉴别诊断，疾病期的监测和治疗效果的监测。如肝胆疾病、药物的筛查等。 （二）测定方法 转氨酶的测定方法有许多种，以往多用比色法如赖氏法(Reitman-Frankel)、金氏法(King)和改良穆氏法(Mohun)，主要不同点为单位定义和标准曲线绘制方法有差异。其中以赖氏法最常用，由于此法操作简便、经济，一些小型实验室仍在使用。目前，国内外实验室多采用IFCC推荐的方法对ALT进行测定。 测定原理 上述反应在最适条件下，NADH的氧化速率与标本中酶活性呈正比；在340nm连续监测吸光度，根据线性反应期吸光度下降速率(-?A/min)，计算ALT的活力单位。 （三）临床意义 ALT在临床上主要用于肝脏疾病的诊断。由于肝细胞中ALT浓度比血液高约7000倍，只要有1/1000肝细胞中的ALT进入血液就足以使血中ALT升高1倍，故此酶是反映肝损伤的一个很灵敏指标。各种急性病毒性肝炎、药物或酒精中毒等引起的急性肝损害时，血液ALT 水平可在临床症状（如黄疸）出现之前就急剧升高，峰值可为20ULN以上，且ALT＞AST。 一般而言，急性肝炎时血液ALT高低与临床病情轻重相平行，且往往是肝炎恢复期最后降至正常的酶，是判断急性肝炎是否恢复的一个很好指标。同时测定并计算AST/ALT比值（DeRitis比值），对急、慢性肝炎的诊断和鉴别诊断以及判断肝炎的转归有特别价值。急性肝炎是时DeRitis比值＜1，肝硬化时DeRitis比值≥2，肝癌时DeRitis比值≥3。 应特别注意的是，重症肝炎时由于大量肝细胞坏死，血中ALT可仅轻度增高，临终时常明显下降，但胆红素却进行性升高，出现所谓“酶胆分离”现象，常是肝坏死的前兆。除肝炎外，心脏、骨骼肌等组织受损及其他肝胆疾病如胆石症、胆囊炎、肝癌和肝淤血时血液ALT水平也可升高。有些药物如异烟肼、利福平、氯丙嗪、地巴唑等也可引起血中ALT升高。但一般而言，这些疾病ALT升高很少超过10ULN，常以400U/L为界，超过此值绝大多数可诊断为肝炎。 二、门冬氨酸氨基转移酶及其同工酶的测定 门冬氨酸氨基转移酶（L-Aspartate aminotransferse，AST），俗称为谷草转氨酶（GOT），广泛分布于全身各组织，尤其以心脏、肝脏、骨骼肌、肾脏中最丰富。与ALT不同，它在细胞内定位于线粒体（m-AST）和胞浆（c-AST）中。主要催化门冬氨酸和α-酮戊二酸之间的氨基转移反应。 （一）适应症 主要用于疾病的诊断和鉴别，疾病期的监测和治疗效果的监测。如心肌梗死、肝胆疾病、骨骼肌损伤、药物的筛查等。 （二）测定方法 AST与ALT的测定方法和方法演变大同小异。国内外实验室多采用IFCC推荐的方法对AST进行测定。m-AST的测定方法很多，有电泳法、免疫沉淀法、层析法、动力学方法等。前两者临床使用较多。 AST测定原理 （三）临床意义 AST以往多用于AMI的诊断。AMI发病6～8h即升高，48～60h达到高峰，4d～5d恢复正常。但由于AST在AMI 时升高迟于CK，恢复早于LD，故诊断AMI价值不大。 肝中AST含量虽低于心肌，但绝对含量（U/mg）仍高于ALT。 肝中AST和ALT含量比值约为2.5：1.0。但由于ALT主要存在于细胞质中，AST主要存在于线粒体中，肝脏疾病病变较轻时，如急性肝炎，血中AST虽亦显著升高，但升高程度不及ALT；但在慢性肝炎，特别是肝硬化时，病变累及线粒体，此时AST升高程度超过ALT。故对疑是肝炎