RNA转化成去氧核糖核酸DNA.pptVIP

Department of Biochemistry 生物化學系 非典型肺炎爆發 今年三月初，嚴重急性呼吸系統綜合症(非典型肺炎)在香港爆發。 香港中文大學醫學院肩負研究非典型肺炎的重要使命。 嚴重急性呼吸系統綜合症最新情況(截至二○○三年七月十二日) 病毒研究階段 副黏液病毒 vs 冠狀病毒 基因解碼階段 決定對冠狀病毒的基因組進行解碼 冠狀病毒的生命周期 冠狀病毒的基因組 基因組的特性 合成正的核糖核酸 (RNA) 約有二萬七千至三萬一千個鹼基 遺傳密碼的組成 遺傳密碼解讀 為甚麼要對冠狀病毒進行基因解碼? 快速及準確的測試 追蹤病毒的突變 追溯病毒來源 製造疫苗及抗體以防治非典型肺炎 樣本收集 鼻咽呼氣 糞便 行動綱領 將核糖核酸(RNA)轉化成去氧核糖核酸(DNA) 為何要將DNA轉化為RNA DNA較安全 DNA較穩定 DNA才可解碼 用基因文庫保存寶貴的病毒基因 基因文庫的製作 將病毒DNA分為片斷 將DNA嵌入載體 將重組的載體放大腸桿菌中 聚合酶連鎖反應 利用聚合酶連鎖反應合成大量DNA 大於五百個鹼基的DNA片斷將會進行基因排序 基因排序反應 基因排序儀 – 每兩小時可以進行九十六個DNA樣本的基因排序，每個序列大約有四百五十個鹼基 基因排序分析 基因排序分析 基因排列及組合 重疊部分有助排列及組合DNA片斷 行動綱領 困難重重 病毒的濃度太低 被猴子細胞內的核糖核酸污染 部份RNA區域不完整 產生較短的互補去氧核糖核酸斷片 刺蛋白的重要性 刺蛋白決定 那一種生物受感染 那一個器官受影響 感染的嚴重性 製造抗體及疫苗的先決條件 完成整個基因體排列 研究計劃進行兩個星期後 (二零零三年四月十六日),完成整個非典型肺炎基因體排列 翌日(二零零三年四月十七日), 非典型肺炎基因體排序在美國國立生物技術信息中心的網頁上公佈 基因組結構與排列 完整的基因組有29,736鹼基 可合成十多個蛋白 冠狀病毒的防禦 冠狀病毒的防禦 冠狀病毒的生命周期 冠狀病毒的生命周期 冠狀病毒的防禦 冠狀病毒的防禦 簡要 基因排列變異顯示出與地理起源的相互關係 可證明病毒種類是於城市裡或城市間爆發 基因排列變異對傳染性及致病性的影響 較小變異的區域可用於診斷化驗 Coronavirus Sequencing Project The Chinese University of Hong Kong 香港中文大學 冠狀病毒的基因解碼及防禦 徐國榮 1433 ( + 0) 1755 ( + 0) 總數 1057??????? 1369??????? 病人、病者家人及探訪者 298 ( + 0) 376?????? 386?????? 醫院/診所醫護人員及醫科學生 現時留院人數 死亡人數 康復出院病人總數 累積個案 性質 24 留院總數: 5 血清測試證實不是SARS: 2 因其他疾病而需繼續留院: 4 深切治療部的病人: 13 康復中病人: 三月廿二日 三月廿八日 刺蛋白 核糖核酸(RNA) 蛋白殼蛋白 薄膜蛋白 冠狀病毒的結構 細胞核 RNA 受體 病毒入侵 感染其他細胞 病毒蛋白 AATCGTCAGTCGGTCAGCAAGGGGTCCAATACTGCAGTCGGTCCAAAACGTAGTCAGTGCAGTCATGCAGTCATGCATGGTCAAACGTGCATGCATGCAGTCGTCCAGCGGGATCAGTCAAAGTCAAGTCTTTAGTCAA DNA及RNA是鹼基的聚合物，而鹼基通常以A，G，C及T四個字母代表 DNA RNA 蛋白 微生物學學系 病毒 RNA 甄別細胞株 DNA 片斷 直接製造病毒DNA 利用大腸桿菌製作基因文庫 聚合酶連鎖反應 基因排序 用生物信息工具重組基因排列 聚合酶連鎖反應 第一個病毒樣本排序 第二至五個病毒樣本排序 500bp 500bp DNA片斷的重疊部份 Fragment 1 Fragment 2 Fragment 3 Fragment 4 Fragment 5 Fragment 6 Fragment 7 冠狀病毒基因組的重組 病毒 RNA 甄別細胞株 DNA 片斷 直接製造病毒DNA 利用大腸桿菌製作基因文庫 聚合酶連鎖反應 基因排序 用生物信息工具重組基因排列 聚合酶連鎖反應 第一個病毒樣本排序 第二至五個病毒樣本排序 SARS-CoV orf 1ab 1 2 3 4 5 6 S E M N 7 8 10 9 5’ 3’ 聚蛋白 刺蛋白 包膜蛋白 薄膜蛋白 蛋白殼蛋白 細胞核 病毒入侵 一. 製造刺蛋白片段,阻止病毒入侵細胞 細胞核 二. 製造受體片段中和病毒 細胞核 R