E花环实验报告.docxVIP

-- --- 花环实验 一 .实验原理 人外周血 T 淋巴细胞表面具有绵羊红细胞 (SRBC)受体，能够与 SRBC 结合形成 花环样细胞团 (即 E 花环 )。已证实 E 受体是人类 T 细胞所特有的表面标志。 当 T 细胞与 SRBC 混合后， SRBC 便粘附于 T 细胞表面，呈现花环状。通过花环形 成检查 T 细胞的方法，称为 E 花环形成试验。根据 花环形成的多少， 可测知 T 细胞的数目， 从而间接了解机体细胞免疫功能状态， 判断疾病的预后， 考核药物 疗效等。由于 T 细胞的异质性，其对 SRBC 的亲和力亦不同，因而 T 细胞可形 成不同类型的 E 花环，其中在 4℃放置 1 h 以上，所形成的花环数代表 T 细胞总 数，称为总花环 (Et 花环 )，而淋巴细胞与 SRBC 混合后不经 4 ℃作用立即反应形 成的花环称为活性花环 (Ea 花环 )。 二 .实验结果（用图示法表示） 三 .讨论 ① .有的细胞能形成玫瑰花环的原因：人 T 细胞膜上具有 CD2 分子，能 够与 SRBC 上的 LFA-3 结合，从而形成以人 T 细胞为中心， SRBC 环绕四周， 形状如玫瑰花环的细胞集团，即 E 玫瑰花环。此外， NK 细胞膜上也有 CD2 分 子，也能形成玫瑰花环，但是 NK 细胞的量非常少，形成玫瑰花环的数量也少。 . 有的细胞不能形成玫瑰花环的原因： a.人血液中含有单核巨噬细胞，其表面 没有 CD2 分子，不能与 SRBC 表面的 LFA-3 结合，因此不能形成玫瑰花环。 b. 实验中所用血液不够新鲜，也可能导致不能够形成玫瑰花环。 c. 时间不够长， 导致 T 细胞表面的 CD2 分子不能够与 SRBC 上的 LFA-3 充分结合，因此只有一 部分 SRBC 与人 T 细胞结合，其余 SRBC 没能够与人 T 细胞结合形成玫瑰花环。 2.SRBC 与淋巴细胞混合后离心速度不能过高， 在 Et 花环试验中，置 4℃应至少 1h 以上或过夜。 3.绵羊红细胞以保存 1 周内最好，超过 2 周则与淋巴细胞结合力下降，超过 5～ 周则不能再用。实验室的绵羊红细胞保存的时间太长，导致其与淋巴细胞的结合能力下降，所以有的细胞可以形成 E 花环，而有的细胞不可以形成 E 花环。 4.Et 花环试验 SRBC 与淋巴细胞混合比例以 100 ∶1 ～200 ∶1 为宜， Ea 花环试 验中以 10 ∶1～20 ∶1 为宜；淋巴细胞离体后不能超过 6h ，否则会影响花环形 成率。 5.温度对实验结果影响较大，故实验温度条件应保持一致，从 4 ℃取出后应立即 计数。 6.计数前将沉淀细胞重悬时，使细胞团块松散均匀即可，不可强力吹打，以免 SRBC 从淋巴细胞上脱落。