当酶标半抗原与抗体结合后.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 葡萄球菌A蛋白，英文名是Staphylococcal protein A,SPA ；植物有丝分裂原ConA?,动物有丝分裂原PHA 在调节胶体金的pH时，先用终浓度为0.1%的聚乙二醇（PEG20000）稳定胶体金后，再插入电极到胶体金溶液中测定pH。 蛋白质溶液标记前，先用低浓度盐水透析数小时，并高速离心去除聚合物。 注意事项： 用稀释液配制成工作浓度保存 稀释液：含稳定剂的缓冲液（PBS、Tris缓冲液） 稳定剂：PEG、BSA常用 加入50%甘油、-18℃可保存1年以上 免疫金的保存： 二、胶体金免疫技术的方法学种类与原理 （一）斑点金免疫渗滤试验 （二）斑点金免疫层析试验 原理： （一）斑点免疫金渗滤试验： Ag或Ab 标本 免疫金 洗涤液 阳性反应呈现红色斑点 硝酸纤维素膜 双抗体夹心法 方法类型： 间接法 待测抗原 胶体金 标记抗体 包被抗体 NC膜 包被抗原 胶体金 标记二抗 待测抗体 NC膜 操作要点： 试剂盒组成： 渗滤装置（反应板） 胶体金标记物 洗涤液 操作要点： 平放反应板，于小孔内滴加待测标本1~2，待完全渗入； 滴加免疫金试剂1~2滴，待完全渗入； 滴加洗涤液2~3滴，待完全渗入； 结果判断：膜上显示淡红色或红色斑点为阳性，无颜色显示为阴性，颜色深浅提示阳性程度。 双抗体夹心法 方法类型： 竞争法 胶体金免疫层析试验（GICA）： 原理： 胶体金技术 + 蛋白质层析技术 方法类型： 间接法 技术要点： 试剂盒组成：胶体金层析条 操作要点（以双抗体夹心法为例）： 将试剂条标记线一端浸入待测标本中2~5秒，或在加样处加一定量的待检标本，水平放置； 5~20分钟内观察结果； 结果判断：出现一条棕红色条带为阴性（保证带），出现两条棕红色条带为阳性；无保证带出现为试剂失效。 临床应用评价： 1. 免疫金测定技术特点 简单、快捷、操作人员不需培训 无需特殊仪器设备 试剂稳定，便于保存 特别适用于床旁检验 2. 免疫金测定技术灵敏度问题 定性和半定量试验，不能准确定量。 敏感性不及酶标法和酶发光免疫测定法 3. 免疫金测定技术临床应用 用于检测正常体液中不存在的物质（如传染病Ag/Ab、毒麻类药物） 检测正常含量极低，却在特殊情况下异常升高的物质（如人β-HCG） 固相膜免疫分析技术 (solid phase membrane-based immunoassay) 是以微孔膜作为固相载体，利用液体可以流过微孔膜，也可以通过毛细管作用在膜上向前移行的特性，以酶或各种有色微粒子（如彩色胶乳、胶体金、胶体硒等）标记抗体或抗原，通过抗原抗体反应进行抗原或抗体检测的检验方法。 胶体金免疫技术（本节课部分）） 斑点酶免疫吸附试验 免疫印迹试验 小结 ： 英语词汇 enzyme immunoassay，EIA ELISA (enzyme linked immunosorbent assay ) coating blocking conjugate hook effect BAS-ELISA（Biotin-Avidin system) ABC (Avidin-Biotin complex) colloidal gold immunoassay Tips The enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) is a test that uses antibodies and color change to identify a substance. ELISA is a popular format of wet-lab type analytic biochemistry assay that uses a solid-phase enzyme immunoassay (EIA) to detect the presence of a substance, usually an antigen, in a liquid sample or wet sample. The ELISA has been used as a diagnostic tool in medicine, as well as a quality-control check in various industries. Antigens from the sample are attached to a surface. Then, a further specific antibody is applied over the surfac