MALDI-TOF-MS在细菌耐药性分析中的临床应用.docVIP

MALDI-TOF MS在细菌耐药性分析中的临床应用 MALDI-TOF MS在细菌耐药性分析中的临床应用 MALDI-TOF MS在细菌耐药性分析中的临床应用 杨 峰，陈 飞，赵 虎 （复旦大学附属华东医院检验科， 上海 200040） 摘要：基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）具有快速、高通量、高准确性和低成本等特点，为临床微生物的鉴定带来了革命性的变化，也给细菌耐药性分析提供了一条新思路。常规细菌耐药性检测方法有纸片法、稀释法、 E-test等，这些方法均需要长时间的培养，不能满足临床对快速药物敏感性指导的需求。MALDI-TOF MS用于细菌耐药性的检测具有巨大的应用价值与前景。已有一些关于MALDI-TOF MS在细菌耐药性检测的实验和临床应用的报道。文章就近年来MALDI-TOF MS在细菌耐药性分析相关的病原体种类、检测方法和检测效果等方面作一综述。 关键词：基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱；细菌；耐药性 目前，细菌耐药性仍呈增强趋势，多重耐药和泛耐药菌株在某些地区的流行播散对人们的健康构成严重威胁[1-3]。临床上对常用抗真菌药耐药的菌株也明显增多，给临床抗真菌治疗带来了很大的挑战[4-5]。而临床常用的体外药物敏感性试验其检测周期往往在24 h以上，不利于及时指导临床合理用药。所以临床对高效、快速的细菌和真菌体外药物敏感性检测的新技术、新方法的需求越来越强烈。 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption ionization time of fight mass spectrometry， MALDI-TOF MS）于20世纪90年代末开始成功用于细菌和真菌的鉴定，由于其检测效率高、准确性好、成本低而被广泛应用于病原体的快速鉴定[6]。近年来，MALDI-TOF MS对细菌、真菌耐药性的检测潜力也逐步被发掘，它的应用加快了对细菌和真菌耐药性检测与分型的速度，其具有很大的应用前景。 1 MALDI-TOF MS检测细菌和真菌耐药性的原理 MALDI-TOF MS检测细菌和真菌耐药性的原理主要有以下几方面： （1）耐药机制为产生耐药酶的菌株，其产生的酶能够水解相应的抗菌药物，抗菌药物水解前后会产生稳定的相对分子质量变化。把样本菌株接种于添加了特定抗菌药物的培养基中培养，如果菌株能够产生相应的酶，就会水解该抗菌药物，抗菌药物水解前后相对分子质量的变化会引起MALDI-TOF MS检测得到的图谱对应峰值发生改变，通过对其进行分析就可以对是否存在相应酶作出判断，据此间接判断菌株的耐药性[7]。 （2）MALDI-TOF MS检测耐药菌株所得到图谱与敏感菌株相比，会出现特定峰值强度的改变、峰值坐标位置的移动和峰值的缺失或增加，利用软件对足够数量耐药菌株的图谱进行分析，可以构建出专门针对该耐药菌株的图谱数据库。将MALDI-TOF MS检测样本菌株得到的图谱与该数据库比对，就可以对其进行耐药性判断或进一步区分耐药菌株亚种[8-9]。 （3）将样本菌株置含不同浓度抗菌药物（一般包含3个浓度梯度：1个高浓度、1个中间浓度和1个无抗菌药物）的培养基中培养，菌株是否具有耐药性与其生长情况有很强的相关性，培养一段时间后，采用MALDI-TOF MS检测各菌株，分析菌株在各个不同浓度抗菌药物中的蛋白指纹图谱得到各自综合相关指数（composite correlation index，CCI），通过计算和比较可以判断样本菌株是否对该抗菌药物耐药[10-11]。 2 β-内酰胺酶检测 MALDI-TOF MS可以作为一种检测β-内酰胺酶活性的工具。许多病原菌能够产生β-内酰胺酶，水解青霉素类和头孢菌素类抗菌药物结构中的β-内酰胺环而使抗菌药物失去抗菌活性[12]。水解后的β-内酰胺环与水解前相比发生了相对分子质量的变化，并且各种抗菌药物在未水解和水解后的相对分子质量是可以确定的，由此在MALDI-TOF MS检测所得到的图谱中也会有相对应峰值的变化，不产生β-内酰胺酶的菌株则检测不出这种改变，从而判断β-内酰胺酶活性的有无和菌株耐药性的产生与否[7，13-16]。由于这种方法的检测基础是酶活性的变化，所以与传统基于微生物在抗菌药物暴露下的生长代谢的耐药性检测方法相比所需时间短很多。另外，可以在培养基中加入对待测菌株有针对性的抗菌药物或离子锌以促进酶活性的表现，能够缩短实验结果的出现时间[17]。有研究已经将这种检测方法应用于分析多种抗菌药物（青霉素、氨苄西林、头孢菌素类和碳青霉烯类抗菌药物等），不同抗菌药物的对应图谱有不同的峰值变化，研究者的实验结果均显示，MALDITOF MS通过检测酶活性判断耐药性有良好的检验效能[7]。 但在另一项研究中，法国的