血糖和血糖的调节.ppt

实验专题模块一 血糖和血糖的调节 血清葡萄糖测定 糖化血清蛋白（果糖胺）测定 生化实验室守则 请同学们仔细阅读《生化实验室守则》，并注意遵守。 微量移液器的使用 选择合适的移液器。 吸头安装。 容量设定。 预洗吸头：在我们安装了新的吸头或增大了容量值以后，应该把需要转移的液体吸取、排放两到三次。 吸液：先将移液器排放按钮按至第一停点，再将吸头垂直进入液面，浸入的深度为：P2、P10小于或等于1毫米，P20、P100、P200小于或等于2毫米，P1000小于或等于3毫米，P5ml、P10ml小于或等于4毫米，平稳松开按钮，切记不能过快。 放液：放液时，吸头紧贴容器壁，先将移液器排放按钮按至第一停点，略做停顿后，再按至第二停点。 卸去吸头：用过的吸头如果不用了，可以用拇指按住移液器顶端的另一个按钮，把枪头打掉。 移液器容量复原：使用完毕，把枪调到最大量程，这样有利于枪的保养。 糖尿病是由于胰岛素分泌不足或/和胰岛素作用低下而引起的代谢紊乱综合征，高血糖是其最主要特征。根据病因，糖尿病可分为不同类型，主要包括1型、2型、其他特殊类型糖尿病和妊娠期糖尿病等。 最近30年我国糖尿病患病率急速增长，约增长了15倍, 成为世界第一糖尿病大国。中国最新流行病学调查显示，2型糖尿病在成年人高度流行，年龄标化的总糖尿病患病率为9.7%。 正常血糖是空腹静脉血浆葡萄糖3.89～6.11mmol /L。若空腹血糖7.00mmol/L和餐后2小时血糖11.10mmol/L即为糖尿病。 糖化血清蛋白（果糖胺）测定可反映糖尿病患者抽血前2-3周内血糖总的水平，亦为糖尿病病人近期监测指标，正常值为1.7～2.8mmol/L。 HbA1c测定可反映糖尿病患者抽血前8～12周的血糖控制情况，病情控制不良的糖尿病病人其HbA1c较正常人高，且与病情控制不良程度相关，正常值为6.5%。 血浆胰岛素和C肽测定有助于了解胰岛B细胞功能和指导治疗，空腹血浆胰岛素正常值为5～15mU/L，正常人血浆基础C肽水平300～600pmol/L。 糖尿病 实验一 血清葡萄糖测定 一、实验目的 1. 掌握血糖的基本知识及空腹血糖、餐后血糖检测在糖尿病诊疗中的应用。 2. 掌握葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖浓度的原理与操作过程。 二、背景与原理 （一）背景 应用酶学方法测定血液葡萄糖是临床化学中的主流方法。最常用的酶学方法有葡萄糖氧化酶法和己糖激酶法。其特点是具有较高的灵敏度、准确度和精密度，使用温和的反应条件，操作简单方便，适用于自动分析仪。 己糖激酶法：第一步是在己糖激酶催化下，葡萄糖和ATP发生磷酸化反应，生成葡萄糖-6-磷酸；第二步是在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶催化下，葡萄糖-6-磷酸和NAD或NADP发生氧化还原反应，生成6-磷酸葡萄糖酸和NADH或NADPH。在波长340nm处，监测吸光度的增高。吸光度的净增高值与葡萄糖浓度成正比。己糖激酶方法和葡萄糖氧化酶方法相比对葡萄糖的特异性更高，不受尿酸和抗坏血酸的干扰，特别适用于急诊检验使用。 葡萄糖氧化酶：本法分极谱分析法和比色法两类。但二者的初反应都是在葡萄糖氧化酶的催化下，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸，同时消耗溶液中的氧，产生过氧化氢。极谱分析法是用氧电极监测溶液中氧的消耗量，氧的消耗量与葡萄糖浓度成正比。比色分析法是用葡萄糖氧化酶和辣根过氧化物酶的偶联反应系统。初始反应中过氧化氢的生成量与葡萄糖浓度成正比。在辣根过氧化物酶进行比色测定。该法的缺点是易受还原性物质如胆红素、抗坏血酸和尿素等干扰，但准确度与精密度都能达到临床要求，操作简便，是目前临床推荐常规检验的方法。 （二）原理 葡萄糖氧化酶（GOD）催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸（D-葡萄糖酸-δ-内酯），并产生一分子过氧化氢。 在色原性受体（4-氨基安替比林偶氮酚）的存在下，过氧化物酶（POD）可将过氧化氢分解为水和氧，并使4-氨基安替比林和酚去氢缩合成红色醌亚胺，即Trinder反应。红色的醌类化合物生成量与葡萄糖含量成正比。 其反应如下： 2葡萄糖 + 2H2O+O2 ??2葡萄糖酸+ 2H2O2 2H2O2 + 4-氨基安替比林+酚 ?? 醌亚胺+ 4H2O 醌亚胺在480～550nm波长有最大吸收，与同样处理的标准液比较，经计算可求出血浆葡萄糖含量。 GOD POD 四、 实验操作 1. 准备健康成年家兔三只（每个实验班），常规饲养。 2. 将三只家兔固定在兔盒上，割破耳沿静脉并留取对照血液1-2ml，凝固后分离出血清备用【血清分离：待凝固后（约20-30分钟），3000～5000rpm，离心5～10分钟，将上清转移至另一离心管中】。 3.按2U/kg体重给第一只兔子注射胰岛素，然后