棉花茎秆无腺体基因gl1的精细定位及棉酚腺体发育相关基因筛选-作物遗传育种专业论文.docxVIP

华中农业大学2016届博士研究生毕业论文2．3田间调查及样品的采集 华中农业大学2016届博士研究生毕业论文 2．3田间调查及样品的采集 25 2．4棉花基因组DNA的提取 25 2．5染色体特异分子标记开发 一27 2．5．1染色体序列信息 27 2．5．2 SSR检测及引物设计 ．．28 2．5．3染色体特异的SSR开发 ．．28 2．5．4同源染色体chr07和chrl6的确定 29 2．6 SSR标记分析 ．．29 2．6．1 PCR反应体系及程序 29 2．6．2聚丙烯酰胺凝胶电泳 30 2．6．3聚丙烯酰胺凝胶银染检测 3 1 2．7基因定位 ．．31 2．7．1表型和基因型数据记录 31 2．7．2多态性引物筛选及其连锁测验 31 2．7．3遗传连锁图谱的构建 32 2．7．4基因精细定位 32 2．8定位区间候选基因分析 ．33 2．9候选基因的扩增 33 2．9，1 RNA提取 33 2．9．2 cDNA反转录 一34 2．9．3候选基因的扩增 35 2．9．4扩增产物的纯化 ．35 2．10候选基因的克隆 ．36 2．10．1候选基因连接到T载体 ．36 2．10．2 TA克隆转化大肠杆菌 37 2．10．3菌液PCR检测、酶切检测与测序 39 2．1 1候选基因的表达量分析 4l 2．12病毒诱导的基因沉默(ⅥGS)载体构建 4l 2．13转录组测序与分析