生物技术制药.基因工程制药-1.ppt

3.限制性酶谱分析法 将初步筛选的阳性克隆小量培养后，提取重组质粒或重组噬菌体DNA，用1-2种RE酶切，然后进行凝胶电泳，检测插入DNA片段大小。 * * 基因文库的应用 * * 4.cDNA文库法 cDNA（complementary DNA） 为具有与某RNA链呈互补的碱基序列的单链DNA，或此DNA链与具有与之互补的碱基序列的DNA链所形成的DNA双链。 mRNA的cDNA，与原来基因的DNA（基因组DNA，genomic DNA）不同而无内含子； 在mRNA存在的3′末端的多A序列的核苷序列，外显子序列、先导序列以及后续序列等。 * * cDNA文库 指某生物某发育时期所转录的全部?mRNA，?经反转录形成的cDNA片段与某种载体连接而形成的克隆的集合。 经典??cDNA??文库构建的基本原理是用Oligo(dT)作逆转录引物，或者用随机引物，给所合成的cDNA?加上适当的连接接头，连接到适当的载体中获得文库。 * * (四）载体DNA与目的基因的连接 DNA分子体外重组： 连接酶催化载体DNA与目的基因DNA片段连接。形成重组子（recombinant)的过程。 1.粘性末端的连接： 经双酶切获得粘性末端，用连接酶进行连接 2.平头末端的连接： 连接效率低，一般采用加尾法、接头法 3.连接效率： 目的基因与载体DNA的摩尔比大于1 * * 不