空肠弯曲菌灌胃经小鼠消化道排出后毒力及致周围神经病变能力变化的研究-神经病学专业论文.docxVIP

目 目 录 中文摘要 1 英文摘要 4 研究论文 守肠弯曲菌灌胃经小鼠消化道排出后毒力及致周围神经病 变能力变化的研究 前言日U舌 ．．‘。 8b 材料与方法 8 结果三日7K’’。’ ’ ‘‘‘。‘。’ ’‘‘‘ 。‘。。。 ‘ ‘ ‘。 。。‘‘‘‘ 。‘‘ 。。。 ’。‘。。。．．1一l，7 附图 ．．20 讨论 ．3 1 结论 3 5 参考文献 ．．35 综述 窄肠弯曲菌、吉兰一巴雷综合征及其关系研究进展 39 致谢 ： ．45 ’个人简历 46 中文摘要空肠弯曲菌灌胃经小鼠消化道排出后毒力及致周围神经病变能 中文摘要 空肠弯曲菌灌胃经小鼠消化道排出后毒力及致周围神经病变能 力变化的研究 摘 要 目的：研究不同来源的空肠弯曲菌(Campylobacterjejuni，cj)经过连 续多批小鼠灌胃消化道排出后，与原代空肠弯曲菌相比，其各分离变异株 间生长繁殖能力、革兰染色形态变化等毒力的不同；同时进一步观察分析 空肠弯曲菌分离变异株间致周围神经病变能力的差异，为了解认识在消化 道环境中空肠弯曲菌毒力改变及不同毒力的空肠弯曲菌致周围神经病变 能力的差异奠定基础。 方法： 1．复苏培养原代空肠弯曲菌：选择河北医科大学第二医院神经内科实 验室．80℃冰箱中冻存的，分离自急性运动性轴索型(AMAN型)吉兰． 巴雷综合征(Guillain．Barre syndrome，GBS)患者粪便中的空肠弯曲菌lulei 株和分离自单纯细菌性腹泻患者粪便中的空肠弯曲菌NCTC 1 1168株。将 它们于室温溶化后，取500ul菌液倒入乘有5ml灭菌布氏肉汤培养基的洁 净西林瓶中，置于三气培养箱中，在42℃微需氧(10％C02、5％02、 85％N2)环境下增菌24小时，后传代至含7％脱纤维羊血的哥伦比亚血 平板培养基上，于相同环境条件下培养24小时，以同样方法传代至第3 代，成功复苏空肠弯曲菌。 2．空肠弯曲菌的鉴定：采用革兰染色和马尿酸钠水解试验的方法鉴定 空肠弯曲菌。 3．实验动物的选择和分组方法：选用4周龄，体重18．209，雄性清洁 级健康昆明小鼠。共分为9个批次，每一批次3组，分别为lulei株组、 NCTC 11168株组和布氏肉汤对照组，每一组2只小鼠，共54只小鼠。 4．给菌方法和浓度：实验组小鼠经口灌胃3×108cfu／ml浓度的活菌菌 悬液0．5ml；对照组小鼠灌胃灭菌布氏肉汤0．5ml，所有小鼠灌喂前均禁 食水12小时，灌胃后立即给予食水。 5．空肠弯曲菌分离培养：将原代空肠弯曲菌lulei株和NCTC 1 1 168株 灌胃第一批次小鼠，共灌胃2次，间隔24小时，分别于灌胃后48小时和 中文摘要72小时采集小鼠粪便，并从粪便中分离纯化上述2个时间点的空肠弯曲 中文摘要 72小时采集小鼠粪便，并从粪便中分离纯化上述2个时间点的空肠弯曲 菌分离变异株。将分离纯化得到的72小时空肠弯曲菌lulei分离变异株和 NCTC 11168分离变异株分别灌胃第二批次小鼠，以此类推，直至完成9 个批次空肠弯曲菌的分离培养。 6．不同批次相同时间点，空肠弯曲菌分离变异株间生长繁殖能力及革 兰染色形态变化观察：细菌的生长繁殖能力是评价细菌毒力的重要指标， 分别采用平板菌落计数法和革兰染色的方法比较各空肠弯曲菌分离变异 株间生长繁殖能力及革兰染色形态变化的差异。 7．实验动物一般情况的观察：自灌胃当日起每天观察小鼠的状态：如 进食水情况、精神状态、大便性状、皮毛光滑程度、体重及肢体活动情况 等，一般观察时间为30天，之后处死解剖动物，取双侧坐骨神经进行神 经病理观察，如动物在30天内出现明显瘫痪症状，随时解剖取材病理观 察。 8．不同批次小鼠周围神经病理学检查：采用HE染色、免疫组织化学 染色、锇酸染色、甲苯胺蓝染色和透射电子显微镜的方法观察不同批次小 鼠周围神经病理变化。 结果： 1．不同批次空肠弯曲菌分离变异株间单位时间内生长繁殖速度不同， 各批次相同采集粪便的时间点分离得到的变异株，随着批次的增加空肠弯 曲菌生长繁殖能力逐渐增强，且呈现出非线性增强的趋势。 2．不同批次空肠弯曲菌分离变异株间革兰染色镜检观察，形态发生变 化。随着批次增加，空肠弯曲菌lulei分离变异株菌体逐渐变长、变细， 螺旋杆状或弯曲杆状程度逐渐明显，呈双“S”形或三“S形；空肠弯 曲菌NCTC 11168分离变异株间菌体逐渐变短，存在由“直杆状”向“C” 形变化的趋势。 3．／J、鼠一般情况的观察：第7批次lulei组1只小鼠于灌胃后72小时 出现明显双侧后肢完全瘫痪症状，完全依靠前肢拖拽活动，活动能力差， 进食水少，精神状态不佳，毛竖起，体重无明显减轻，大便性状无明显改 变，余实验组和对照组小鼠在灌胃后30天解剖时活动能力及进食