全反式维A酸与骨形态发生蛋白联合应用对不同鼠源细胞骨钙素及成骨.PDFVIP

Med J Chin PLA, Vol. 44, No. 4, April 28, 2019 　287 论　著 全反式维A 酸与骨形态发生蛋白联合应用对不同鼠源细胞骨 钙素及成骨相关基因表达的影响 沈晨曦，李米，李金源，毕文娟 [摘要] 　目的　探讨全反式维A 酸( AT R A ) 与骨形态发生蛋白( B M Ps)单独或联合应用对小鼠成骨前体细胞 (MC3T3-E1)和大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs) 的骨钙素(OCN) 以及成骨相关基因ALP 、OCN 、Runx2表达的影响。 方法　传代培养MC3T3-E1 细胞及BMSCs ，分别经不同浓度细胞因子刺激培养后分为10个组：空白对照组、ATRA 组、 5ng/ml BMP2/7组、50ng/ml BMP2/7组、5ng/ml BMP2组、50ng/ml BMP2组、ATRA+5ng/ml BMP2/7 组、ATRA+50ng/ml BMP2/7组、ATRA+5ng/ml BMP2 组、ATRA+50ng/ml BMP2 组，采用免疫荧光染色观察细胞形态，免疫酶联吸附实验 (ELISA)检测两种细胞OCN的表达，实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测ALP 、OCN 、Runx2基因的表达。结果 　免疫荧光染色观察结果显示，MC3T3-E1及BMSCs 细胞生长状态良好，结构完整。单独应用ATRA 可明显抑制两种细 胞(MC3T3-E1及BMSCs) 的OCN表达，第7天尤为明显：MC3T3-E1 细胞ATRA 单独组[(20.97 ±0.31)ng/ml] 明显低于空白 对照组[(33.45 ±0.55)ng/ml] ，BMSCs细胞ATRA单独组[(9.90 ±0.16)ng/ml]也明显低于空白对照组[(14.30 ±0.53)ng/ml] ， 差异均有统计学意义(P 0.05) 。单独应用BMPs可浓度依赖性地促进细胞OCN表达，且BMP2/7促进作用更强，50ng/ml BMP2/7作用后MC3T3-E1 细胞的OCN浓度为(47.13 ±0.59)ng/ml ，BMSCs 的OCN浓度为(49.92 ±0.53)ng/ml ，50ng/ml BMP2/7 能够完全拮抗ATRA 对细胞OCN表达的抑制作用(P 0.05) 。RT-qPCR检测结果显示，单独应用ATRA 可明显抑 制MC3T3-E1 细胞ALP 、OCN基因的表达，但可促进Runx2基因的表达(P 0.05) ，单独应用BMPs呈浓度依赖性地促进 MC3T3-E1 细胞成骨相关基因的表达(P 0.05) ，ATRA 可显著抑制BMPs对OCN基因表达的促进作用，但ATRA 与50ng/ml BMP2/7 可协同促进ALP 基因的表达(P 0.05) ；单独应用ATRA 第7 天可显著促进BMSCs Runx2基因的表达，但可抑制 ALP 、OCN基因的表达(P 0.05) ，50ng/ml BMPs可显著促进BMSCs ALP 、Runx2基因的表达(P 0.05) ，50ng/ml BMP2/7 可拮抗ATRA 对ALP基因表达的抑制作用并促进其表达(P 0.05) 。结论　单独应用ATRA 可抑制细胞OCN蛋白的表达，抑 制细胞ALP 、OCN基因的表达；BMP2/7可显著促进细胞OCN蛋白的表达，BMPs可促进成骨相关基因的表达；50ng/ml BMP2/7可完全拮抗ATRA 对细胞的成骨抑制作用。 [关键词]　全反式维A 酸；骨形态发生蛋白；骨钙素；成骨相关基因表达 [中图分类号]　R336　　　　[文献标志码]　A　　　　[文章编号]　0577-7402(2019)04-0287-10 [DOI]　10.11855/j.issn.0577-7402.2019.04.04 Effects of joint application of all-trans retinoic acid and bone morphogenetic protein on the expression of osteocalcin and osteogenic genes in different cells * SHEN Chen-xi, LI Mi, LI Jin-yuan, BI Wen-juan