GB/T 33114-2016李属坏死环斑病毒检疫鉴定方法.pdf

ICS 65.020.01 k__ 、 B 16 G邑 中华人民共和国国彖标准 GB/T 33114—2016 李属坏死环斑病毒检疫鉴定方法 Detection and identification of Prunus necrotic ringspot virus 2016-10-13 发布 2017-05-01 实施 GB/T 33114—2016 ■ i r ■ ■ i 吕 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC 271)提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局、福建省农业 科学院。 本标准主要起草人：张永江、黄迎波、孔君、谢丽雪、李桂芬、马洁、辛言言、魏梅生。 T GB/T 33114—2016 李属坏死环斑病毒检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了李属坏死环斑病毒｛Primus necrotic rin^spot -virus ）的检疫鉴定方法。 本标准适用于可能携带李属坏死环斑病毒的植物及其产品的检疫鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本文 件 。凡是不注日期的引用文件 ，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 SN/T 2122 进出境植物及植物产品检疫抽样 SN/T 2964 植物病毒检测规范 SN/T 3457 植物病毒分子生物学检测规范 3李属坏死环斑病毒基本信息 学名:Prunus necrotic ringspot virus 缩写-PNRSV 分类地位:雀麦花叶病毒科（Bromoviridae）,等轴不稳环斑病毒属（IWrdrus ）。 李属坏死环斑病毒其他信息参见附录A。 4方法原理 李属坏死环斑病毒的血清学特性和基因组特征是该病毒检疫鉴定的依据 。根据PNRSV与抗体之 间的特异性反应，对植物样品进行双抗体夹心酶联免疫吸附测定（DAS-ELISA）；依据PNRSV的基因 组特征建立RT-PCR.实时荧光RT-PCR检测方法；通过这些方法的有效组合 ，判断样品是否带有 PNRSV o 5仪器、用具及试剂 5.1仪器 电子天平（感量0.001 g） 、高速冷冻离心机、小型瞬时离心机、普通冰箱、超低温冰箱 （一80 °C）、制 冰机、旋涡振荡器、磁力搅拌器、高压灭菌锅、pH计、超净工作台、PCR仪、微波炉、电泳仪、电泳槽、凝胶 成像分析仪、酶标仪。 5.2用具 酶联板、可调移液器（2.5 mL.10 卩L 、20 mL,100 yL 、200 卩L 、1 000 yL）和可调移液器头、Eppendorf 管、研钵、微型磨杵等。