霍乱弧菌实验室检wang测.pptVIP

霍乱弧菌的实验室检测与分析 实验室检查： （一）血液检查：血液浓缩表现。 （二）尿常规检查：可见少量蛋白、白细胞、红细胞、管 型等。 （三）粪常规检查：为水样便，无炎症细胞成分。 （四）粪便细菌学检查： 1 粪便直接涂片镜检：取标本直接涂片，干燥固定，革兰氏染色，油镜下观察，可见排列成鱼群状的革兰染色阴性的弧菌。 2 动力和制动试验：取急性病人水样便制成悬滴（压滴）标本，高倍镜或暗视野下直接观察细菌动力，可见来回穿梭似流星状细菌，为动力阳性；如再加入1滴不含防腐剂的霍乱多价诊断血清（效价≧1：64）；可见最初运动活泼的细菌运动停止并发生凝集，为制动试验阳性，提示有霍乱弧菌。 常用的选择培养基为硫代硫酸盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板（TCBS），霍乱弧菌在其中可形成较大的菌落，因发酵蔗糖产酸而使菌落呈黄色。 O1群和O139群抗原构造与血清分型 霍乱快诊试剂 O1群霍乱胶体金标记快诊卡 O139群霍乱胶体金标记快诊卡 注意：此类方法检出限105个菌/ml,因此在轻型病例及带菌者调查中存在漏检的可能，需增菌后培养后检测，提高检出率 * 病原体 ?目前有致病性的霍乱弧菌有O1群霍乱弧菌（古典生物型、埃尔托生物型）和非O1群霍乱弧菌中的O139血清型霍乱弧菌。 ? 发病特征： ? 剧烈腹泻、呕吐、严重脱水时致酸中毒、循环衰竭而致死亡 ? 不治疗或医疗很差的条件下病死率可达到20－50％（重症病人达70－100％） ? 流行特征： ? 发病急 ? 传播快 ? 波及范围广 ? 能引起大流行 霍 乱 乱于胃肠则为霍乱 霍乱诊断标准 带菌者： 无霍乱临床表现，但粪便或肛拭子细菌培养检出O1群或/和O139群霍乱弧菌者。 疑似病例：下列任一类病例均为疑似病例。 ? 与霍乱病人或带菌者有密切接触史或共同暴露史，临床表现为轻型病例 ； ? 临床表现为轻型病例 或中毒型病例，并粪便、呕吐物或肛拭子标本霍乱毒素基因PCR检测阳性或粪便、呕吐物或肛拭子标本霍乱弧菌快速辅助检测试验阳性 ； ? 中、重型病例 。 临床诊断病例：符合下列任一类病例均为临床诊断病例。 ? 临床表现为轻、中、重型或中毒型病例，并在腹泻病患者日常生活用品或家居环境中检出O1群或/和O139群霍乱弧菌； ? 在一起确认的霍乱暴发疫情中，暴露人群中临床表现为轻、中、重型或中毒型病例。 实验室确诊病例： ? 临床病人并粪便、呕吐物或肛拭子细菌培养分离到O1群或/和O139群霍乱弧菌 ； ? 在疫源检索中，粪便培养检出O1群或O139群霍乱弧菌前后各5天内有腹泻症状者。 霍乱的实验室检测 ? 细菌分离培养 ? 辅助检测方法 ? 制动试验 ? 免疫荧光球法 ? PCR检测 ? 胶体金检测卡 。。。。。。 标本-粪便、呕吐物、水体、食品、、、 前处理：运输、调pH 增菌：碱性蛋白胨水（水体：加十倍浓缩液），6h – 过夜 涂平板，16h ： 4号琼脂、TCBS、庆大霉素 挑可疑菌落、多价血清凝集 血清分型、生化鉴定 胶体金层析卡检测 核酸提取 荧光PCR检测 问题：实验时间；灵敏度；初筛；等待时间 ？ ？ 标本的采集和运输 采集： 病例：粪便、肛拭子、呕吐物 未使用抗生素之前 “健康”人：粪便、肛拭子 其他传播环节的标本：食物、水、操作台、砧板、下水道口…… 要求：位置、数量 水样便呕吐物一般1ml-3ml，成形便采指甲大小的粪量；肛拭子由肛门插入直肠3-5cm处旋转后取出 运输： C-B运输培养基（pH8.4） 碱性蛋白胨水：不是最佳的，尤其6小时内还不能进行培养时，不要用 运输培养基用前预冷1-2小时，采样后不能立即运至实验室时，需冷藏 划平板 挑菌落与玻片凝集 庆大霉素平板和4号琼脂：多呈半透明状，菌落中央常呈灰色或灰黑色，并随培养时间的延长而加深（由于这类培养基均含有亚碲酸盐成份）。 TCBS（硫代硫酸盐枸櫞酸盐胆盐琼脂）：菌落生长呈黄色发亮、表面光滑、润湿、稍凸起、边缘整齐。 与诊断血清的玻片凝集： 多价血清 O1：小川、稻叶 O139 每份标本至少挑选5个以上的疑似菌落逐一进行鉴定。 血清学鉴定： 对可疑菌落与O1群霍乱多价诊断血清作玻片凝集试验，如很快出现肉眼可见的明显凝集即为阳性。 阳性者必须用生理盐水按同样方法作对照试验，以排除菌体自凝而导致的假阳性反应。 O1群多价血清凝集阳性者用小川和稻叶单价血清进行进一步分型。 O1群多价血清不凝集的可疑菌