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一、实验原理 琼脂糖是一种天然聚合长链状分子,可以形成具有刚性的滤孔,凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度 DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷,在外加电场作用下向正极泳动 DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时,有电荷效应与分子筛效应。不同DNA的分子量大小及构型不同,电泳时的泳动率就不同,从而分出不同的区带 四、实验步骤(1) ⑴ 1g 琼脂糖加入100ml 1×TAE电泳缓冲液中,摇匀。在微波炉中加热至琼脂糖完全溶解。(冷却到60℃,加入100μl的0.5mg/ml EB,并摇匀。) ⑵ 用胶带将制胶板两端封好,插入适当梳子,将溶解的琼脂糖(约50℃)倒入,室温冷却凝固 ⑶ 充分凝固后撕掉两端的胶布,将凝胶置入电泳槽中,加1×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶1-2mm,小心垂直向上拔出梳子。 结果与分析 图1 猪基因组DNA1%琼脂凝胶电泳图 结果与分析 图2 PCR产物琼脂凝胶电泳图 (1、2、3、4为PCR产物,M为DL2000Marker) * * 动物遗传学实验 实验六 琼脂糖凝胶电泳 二、实验目的 掌握琼脂糖凝胶电泳分离DNA 的原理和方法 猪基因组DNA及PCR产物 电泳仪,电泳槽,电子天平,移液器,枪头, 微波炉,紫外透射检测仪等。 琼脂糖,1XTAE电泳缓冲液,溴化乙锭(EB),6X载样缓冲液 :Ⅰ 0.25%溴酚蓝 ,0.25%二甲苯青 ,40%蔗糖水溶液;Ⅱ 0.25%溴酚蓝 ,0.25%二甲苯青 ,30%甘油水溶液 三、实验材料、器具及药品 (4) 用移液器吸取总DNA或质粒样品4μl于封口膜上,再加入2μl 的6X载样缓冲液,混匀后,小心加入点样孔。 ⑸ 打开电源开关,调节电压至3-5V/cm,可见到溴酚蓝条带由负极向正极移动,电泳约30min-60min。 ⑹ 将凝胶放入EB染液中染色5-10min,用清水稍微漂洗。 ⑺ 将染色后的凝胶置于紫外透射检测仪上,盖上防护观察罩,打开紫外灯,可见到发出荧光的DNA条带。 四、实验步骤(2) *
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