擎天凤梨苞片叶绿素代谢关键基因的分离及褪绿的分子机理.PDF

中国农业科学 2016,49(13):2593-2602 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.13.015 擎天凤梨苞片叶绿素代谢关键基因的分离及褪绿的分子机理 刘建新，丁华侨，田丹青，王炜勇，刘慧春 （浙江省萧山棉麻研究所，杭州 311202 ） 摘要： 【目的】擎天凤梨是一种新潮花卉，其苞片在成花变色过程中常常伴随着绿色的逐渐消退。分离叶绿 素生物合成与降解途径的关键基因，探索在苞片变色过程中叶绿素代谢的分子基础和机理，有助于解析呈色苞片 中绿色退化的原因。【方法】通过cDNA文库构建及EST批量测序获得叶绿素合成关键酶：谷氨酰tRNA合成酶基因 （glutamyl-tRNA synthetase， GTS ）和尿卟啉原-Ⅲ合酶基因（uroporphyrinogen-Ⅲsynthase，UROS ）；通过同 源克隆技术获得叶绿素降解关键酶：脱镁叶绿素酶（pheophytin pheophorbide hydrolase/pheophytinase，PPH ） 基因；通过采用透光系数法测量叶绿素含量、HPLC法测定类黄酮含量以及采用实时定量PCR法测定叶绿素代谢关 键基因的基因表达模式，探索呈色苞片中绿色部分消失的分子机理。【结果】获得的GTS （GenBank：KP144289）， 序列长为 1 140 bp，编译 171AA 的蛋白氨基酸序列，并存在 GlnRS-cataytic core 和 Nt-trans superfamily 保 守区；获得的 UROS （GenBank：KP144288）cDNA 序列长为 613 bp，编译 188AA 的蛋白氨基酸序列，并存在 HemD 和 HemD Superfamily 保守区；获得的 PPH （GenBank：KP723523）cDNA 序列长为 266 bp，编译 88AA 的蛋白氨基 酸序列，并存在 Abhydrolase-6 保守区。通过对不同变色阶段苞片的叶绿素、类黄酮含量测定以及叶绿素代谢相 关基因的表达水平分析，可知苞片变色过程伴随着叶绿素含量的显著降低和类黄酮含量的明显增加，同时叶绿素 合成相关的 GTS 和 UROS 表达水平也明显降低，而叶绿素降解关键酶基因PPH 的表达水平在苞片变色初期显著上升， 在变色完成后则降低到接近绿叶状态的最低水平。而作为对照材料的绿叶，其叶绿素含量是最高的，而类黄酮含 量是最低的，同时叶绿素的合成相关酶基因表达量最高，而降解相关酶基因表达量最低，这与彩叶植物中叶绿素 和类黄酮色素的表现较为一致。【结论】获得了擎天凤梨的叶绿素合成相关酶基因GTS 和 UROS 以及降解关键酶基 因PPH。由于叶绿素合成量减少，降解量显著增加引起叶绿素含量的降低，从而影响苞片变色过程中绿色的消退， 并伴随类黄酮含量的增加。PPH 在叶绿素的降解过程中起关键性作用。 关键词：擎天凤梨；叶绿素；谷氨酰tRNA 合成酶基因；尿卟啉原-Ⅲ合酶基因；脱镁叶绿素酶 Isolation of Chlorophyll Metabolism Key Genes and Molecular Mechanism of Green Fade in Guzmania Bracts Discoloration Process LIU Jian-xin, DING Hua-qiao, TIAN Dan-qing, WANG Wei-yong, LIU Hui-chun (Xiaoshan Cotton and Bast Fiber Crops Research Institute of Zhejiang Province, Hangzhou 311202) Abstract: 【Objective 】 Guzmania is a trendy flower. Its flowe