纳豆激酶-生物产业技术.PDF

技 术 进 展 纳豆激酶，一种潜在的用于预防与治疗 心血管疾病的功能食品添加剂 李淑英，辛凤姣，王凤忠 中国农业科学院农产品加工研究所，北京 100193 摘要：纳豆激酶是一种具有高效纤维蛋白溶解活性的丝氨酸蛋白酶，由枯草属菌株、假单胞菌属菌株和海洋生 物合成。与常规的纤维蛋白溶解酶相比，纳豆激酶具有高效、无毒、半衰期长、可以口服、成本低廉等优点， 在功 能性食品添加剂和心血管疾病预防与治疗等方面极具应用潜力。对纳豆激酶及其生产菌株选育、发酵条件 优化、重组表达、分子改造、分离纯化、功能研究和安全评估等方面进行了简单介绍，并归纳总结了纳豆激酶 现有问题，同时就其生产和应用前景进行了展望。 关键词：纳豆；纳豆激酶；纤维蛋白；枯草芽孢杆菌；心血管疾病 DOI: 10.3969/j.issn.1674-0319.2017.05.014 纳豆激酶（NK ，E C 2 ）是由枯草芽孢杆 白酶（protease ）等蛋白之间序列同源性极高（大于 菌分泌表达的一种高效纤维蛋白溶解酶，最早从传统 86% ）（表1）。NK 成熟肽的结晶结构已经得到解析 [1] 。NK 由 aprN [3] ［图1（b ）］。其活性中 的日本大豆发酵食品——纳豆中发现 （PDB ID ：4DWW 和 3VYV ） 基因编码，基因开放阅读框全长1143bp，起始密码子 心包括催化三联体（Asp32 、His64 和Ser221）、氧离 为GTG，终止密码子为TAA 。全蛋白由信号肽、前 子洞（Asn155 ）和底物结合位点（Ser125、Leu126 [4] 。NK 因与枯草杆菌蛋白酶具有很高的 导肽和成熟肽组成：信号肽由29 个氨基酸残基组成， 和Gly127 ） 引导NK 跨膜分泌；前导肽由77 个氨基酸残基组成， 序列和结构同源性，而被划分到碱性丝氨酸蛋白酶 作为胞内分子伴侣辅助NK 折叠；成熟肽由275 个氨 家族，但是只有NK 对纤维蛋白显示了极高的底物 [5] 基酸残基组成，与NK 的生物学功能相关，因此被称 特异性 。 为功能肽［图1（a ）］。NK 成熟肽的分子量为27.7kDa、 [2] （a ） 等电点6.60 。 以纳豆枯草芽孢杆菌NC2-1 合成的NK 成熟肽为 模板，在NCBI 序列文库中进行序列检索，获得同源 （b ） 性大于86% 的序列100条。比对发现，NK 之间，以及 NK 与丝氨酸蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶（subtilisin ）、 肽酶（peptidase ）、角蛋白酶（keratinase ）、弹性蛋白 酶（elastase ）、纤维蛋白酶（fi brinolytic enzyme ）、蛋 第一作者：李淑英，博士，副研究员。主要从事微生物发酵，功能成 分的分离、提取、鉴定、大量制备、功能研究、机制探索、改造和生 物合成等研究工作。E-mail：lishuying2000@163.com 通讯作者：王凤忠，研究员，硕士生导师，食品功能因子研究与利用 创新团队首席科学家，现任中国农业科学院农产品加工研究所副所长。 从事特色农产品加工及质量标准工作，围绕石斛等特色农产品开展相 图 1 NK 序列结构图 关的功能食品开发及风险评估研究。E-mail：wangfengzhong@ （a ）NK 序列示意图；（b ）NK 结晶结构图 （PDB ID: 4DWW ） 100 生物产业技术 2017. 06（11月） 万方数据 技 术 进 展 纳豆激酶，一种潜在的用于预防与治疗心血管疾病的功能食品添加剂 表 1 NCBI 序列文库中部分与 NK 高同源性序列汇总