生物物理学-2015年第10讲+细胞膜的生物物理学-01.pptVIP

* 2.胆盐类去污剂 去氧胆酸盐是一种有效的溶膜去污剂。 (去氧)胆酸 * 去污剂－蛋白复合物中的膜蛋白的构象 适宜的溶解条件可以延缓蛋白的失活。以下几个方法可以帮助保持蛋白的活性构象： (1)向溶解体系中加入甘油、蔗糖等多元醇类化合物。有利于保持其天然构象。 (2)蛋白活性的保持有时依赖于能与其特异结合的金属离子或小分子化合物的存在。如，较高的离子强度（0.4MKCl）有助于稳定蛋白。 * 分离膜蛋白时去垢剂选择的因素： 去垢剂的温和性。这对保持分离膜蛋白的天然构象十分重要。例如SDS是一种强离子去垢剂，具有很好的膜溶解能力，但温和性不理想。 * The End * * * * * * * * * Dehydration of K+ as it moves into the selectivity filter requires energy This is balanced by the energy regained by the interaction of K+ with the carbonyl oxygens, which serve as surrogate water molecules Na+ is too small to interact with the carbonyl oxygens, and hence could enter the selectivity filter only at great energetic expense. Hence Na+ is excluded, and the filter selects K+ with high specificity * * 细菌K+ Channel的三维结构 (Doyle et al, Science 280, 69,1998) * 细菌K+ Channel的三维结构 * K+ Channel的结构特点 带负电的氨基酸集中于通道两端的入口与出口处 一个环从pore helix伸向通道出口处， 形成选择性滤器 (selectivity filter), 并起到脱水作用 由4个亚基构成的选择性滤器形成一个短而坚固的狭孔，孔的直径0.3nm 一个笼子只能容纳一个钾离子 选择性滤器(笼子)由3个主链羰基构成 * K+ Channel的结构特点 * K+ Channel的选择性 -为什么阴离子不能通过？ 带负电的氨基酸（红色）集中于通道两端的入口和出口处 静电场作用 吸引阳离子 (cations) 排斥阴离子 (anions) * Cartoon Potassium ion channel * Na+离子和钾离子谁的半径大？ Na+离子是否可以通过？ * K+ Channel的选择性 -Na+能否通过？ 一种流行观点： 当离子进入选择性孔道时，必须脱水 对K+而言，选择性孔道的大小合适 K+与羰基作用，形成配位复合物 对Na+ 而言，选择性孔道比Na+ 大 Na+不能有效的与羰基作用 Na+不能有效脱水，无法通过滤器 * 离子与K+ Channel的相互作用 * 事实上，这种观点目前已经被证反，通道在极端条件下（钾离子完全不存在）是可以通透钠离子的。 Nature Structural Molecular Biology (17): 1019–1023, (2010) * K+ Channel如何开关？ 形成selectivity filter的结构非常坚固 在通道开关过程中不发生构像变化 跨膜螺旋在通道开关过程中发生构像变化, 控制底部的开启 * 细菌K+ Channel的开关机制 (Jiang et al, Nature 417, 523, 2002) 红色：关闭状态；黑色：开放状态 * 通道开关的控制类似于照相机光圈的运动 通道并不完全关闭，形成通道的氨基酸侧链阻碍了离子通过 K+ Channel开关的模式图 * 负责“拧紧” 通道闸口 * 膜蛋白结构实例3- ATP合成酶 ATP合成酶 (ATP synthase) 存在于线粒体内膜上 利用跨膜质子电化学梯度驱动ATP合成 结构由剑桥MRC分子生物学实验室J.Walker用X-射线晶体学解析 J.Walker荣获1997年Nobel化学奖 * ATP 合成酶的构成 F1- the catalytic subunit 当将F1从膜上分离下来时，发现F1可催化 ATP 水解 Fo- a proton channel 当把F1从膜上分