高山离子芥冷诱导基因在甘蔗上的遗传转化分析.pdfVIP

童誊j ．。 、、，誉∥ ㈠．h：■j～一、 高山离子芥冷诱导基因在甘蔗上的遗传转化研究 摘要 L．)是我国乃至世界最主要的糖料作物。广西是 甘蔗(Saccharumofficinarum 我国最大的甘蔗原料产地，但由于近年来低温天气频频出现，导致甘蔗产量减 少，在含糖量降低，造成了巨大的经济损失。甘蔗是无性繁殖作物，具有复杂 多倍体、非整倍体、高度杂合等特性，因此使用常规方法进行定向育种十分困 难。利用转基因技术对甘蔗进行改良具有高效性，可以加速新品种选育。 本研究以高山离子芥冷诱导基因Cbcorl5a为目的基因、Bar基因为筛选标 记，构建了含有CaMV35S启动子甘蔗转基因双元植物表达载体 组织。主要研究结果如下： 1、不同激素组合影响甘蔗愈伤组织分化。研究结果表明，2．0 mg／L的KT 和0．2 mg／L的NAA的分化培养基分化率最高，分化率达到89％。 2、不同激素浓度和蔗糖浓度影响再生苗生根速率。通过调节NAA和蔗糖 浓度筛选最佳生根培养基。研究结果表明，使用含有5．0 mg／L的NAA和70g／L 的蔗糖的培养基最有利于甘蔗生根。 3、筛选标记PPT浓度对再生植株影响。研究结果表明，愈伤组织需使用 0．75 mg／L的PPT筛选，幼苗应使用0．5mg／L的PPT筛选。 4、不同抗生素浓度对农杆菌抑制效果。研究结果表明，在基因导入愈伤组 织共培养3天后，使用500 mg／L的Cef(头孢噻肟钠)进行抑菌，甘蔗分化出 幼苗以后，使用300 mg／L的Cef进行抑菌生长，幼苗生根以后使用200mg／L 的Cef进行抑菌生长。 5、阳性转基因甘蔗鉴定，通过农杆菌介导法转化，目前获得了9株抗性植 株，经PCR检测，有5株呈阳性。 本实验建立了完整的甘蔗转化体系，并成功获得转基因植株。 关键词：高山离子芥冷诱导基因；双元表达载体构建；甘蔗；农杆菌介导 法；遗传转化 II GENETICTRANSFORMATIONOFCHD脚()兄4 B啪上MMCOLD—INDUCEDGENESINSUGARCANE murahccicinarumaSL D∥D历cinarumL．)．) (Saccharum ABSTRACT Ithasknownthat oneofthemost sugarcane(SaccharumofficinarumL．)is inChinaand theworld．And has importantsugarcrops throughout Guangxiprovince of duetothe of the numberofrawmaterials frequence largest sugarcane．Howeveg coldstressinrecent