毕业设计（论文）《红豆杉内生真菌发酵培养过程中的碳源优化》.docVIP

不同碳源对红豆杉内生真菌发酵培养条件的优化 PAGE 9 红豆杉内生真菌发酵培养过程中的碳源优化 江南大学药学系 药学班 1绪论 1.1引言 肿瘤的治疗在很大程度上依赖于抗肿瘤药物，抗肿瘤药物研究方兴未艾。紫杉醇(Paclitaxel，商品名Taxol)是从红豆杉树皮中分离提纯得到的植物抗肿瘤药，已有40余年的研究历史。由于其具有良好的抗癌活性和独特的抗癌机理，因而被认为是抗癌药物的“明星”。自1992年以来，紫杉醇已在许多国家成为治疗卵巢癌和乳腺癌的重要药物[[1]张亚妮，董兆麟. 一株产紫杉醇真菌发酵条件的研究，西北大学学报，2003，623(3)：310～311]。 [1]张亚妮，董兆麟. 一株产紫杉醇真菌发酵条件的研究，西北大学学报，2003，623(3)：310～311 由于紫杉醇的药源植物——红豆杉属植物生长缓慢，紫杉醇含量很低 (低于为树皮干重的0.015%)，而现有的资源又有限，因而紫杉醇的供应一开始就受到人们的关注。 多年来人们一直在寻找能替代直接从植物中提取紫杉醇的方法[[2]王淑月译 紫杉醇类似物，药学进展，1995，19（3）：159~163、[3]王建锋，吕华鹰，苏文金. 植物内生真菌产紫杉醇的研究，微生物学通报，2000，27（1）：58~60]。紫杉醇的化学全合成虽已完成，但路线复杂，目前无商业价值；紫杉醇的半合成在一定程度上为缓解紫杉醇的供求矛盾；近年来分别从红豆杉属（Taxus）中的短叶红豆杉（T. brevifolia Nutt.）、云南红豆杉（T. yunnanensis）、西藏红豆杉（T. wallichinana）等树皮中分离中得到能产生紫杉醇的内共生真菌，这无疑为解决紫杉醇药源危机提供了一种新的途径。 [2]王淑月译 紫杉醇类似物，药学进展，1995，19（3）：159~163 [3]王建锋，吕华鹰，苏文金. 植物内生真菌产紫杉醇的研究，微生物学通报，2000，27（1）：58~60 1.2内共生真菌 内共生真菌(endophytic fungus)是一大类尚未被充分认识的真菌，它泛指那些生活在健康植株中而不引起任何明显病害症状的所有真菌。在整个真菌发展史上，内共生真菌的研究历史并不长[[4]郭良栋 内共生真菌研究进展 菌物系统 2001，20(1)：148~152] [4]郭良栋 内共生真菌研究进展 菌物系统 2001，20(1)：148~152 1924年，Lewis首次报道禾本科植物叶片中存在内共生真菌，但此后的研究工作一直很少，直到近30年，对于植物内共生真菌的研究才趋于活跃。自从A. Stierle证明Taxus brenifolia nutt中的内共生真菌Ｔaxomyces andreanae可以产生紫杉醇，对于植物内共生真菌的研究更加引人瞩目[[5]孙剑秋 朱红标 周东坡等 东北红豆杉内共生真菌分离方法的研究 齐齐哈尔大学学报1999，15(3)：13~16]。 [5]孙剑秋 朱红标 周东坡等 东北红豆杉内共生真菌分离方法的研究 齐齐哈尔大学学报1999，15(3)：13~16 目前为止，内共生真菌生产紫杉醇产量也极低，这就需要进行多方面的研究。本课题是以不同的碳源种类和配比对红豆杉内共生真菌发酵培养条件优化的研究。 1.3本论文研究的内容 碳源在微生物中是用于合成菌体的含碳物质及其骨架，并为微生物代谢提供能量。除自养菌能以CO2作为唯一碳源外，大多数微生物是以有机含碳的化合物做为碳源和能源。 红豆杉内共真菌发酵培养选用的碳源一般有葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、果糖等。糖类的种类和浓度对细胞生长的影响很大，本试验运用正交试验设计对发酵培养基的碳源进行优化。 2.材料和方法 2.1.材料 2.1.1试剂 葡萄糖 AR 中国医药集团上海化学试剂公司 麦芽糖 BA 上海生物化学试剂公司 蔗糖 AR 上海化学试剂有限公司 花生饼粉 无锡第一制药有限公司提供 豆饼粉 无锡第一制药有限公司提供 NH4NO3 AR 宜兴市第二化学试剂厂 琼脂 BA 中国医药集团上海化学试剂公司 蛋白胨 BA 中国医药集团上海化学试剂公司 酵母浸膏 BA 中国医药集团上海化学试剂公司 MgSO4 AR 中国竟山区塔美化工厂 KH2PO4 AR 无锡市民丰试剂厂 CHCl3 AR 宜兴市展望化学试剂厂 CH3OH HPLC 上海陆都化学试剂厂 精密试纸 pH 5.4~7.0 上海三爱思试剂有限公司 2.1.2培养基 沙氏培养基： 葡萄糖20g，麦芽糖5g，蛋白胨10g，酵母浸膏5g，琼脂15~20g，配成1000ml，pH自然，0.1Mpa（121℃）灭菌20分钟，即得。 种子培养基： 葡萄糖20g，花生饼粉3g，MgSO43g，KH2PO43g，NH4NO33g，配成1000ml。50m