毕业设计（论文）《对蔗糖酶的测试与研究》.docVIP

对啤酒酵母的蔗糖酶的相关测试与研究 摘要：目的 学习测试与研究蔗糖酶的相关技术，以20克新鲜啤酒酵母菌为原料进行一系列实验。方法 蔗糖酶的提取及初步提纯，蔗糖酶的纯化——Q Sepharose-柱层析法，蔗糖酶活力的测定，Folin-酚法测定蔗糖酶蛋白质含量测定及比活力计算，微量凯氏定氮法测蔗糖酶中总蛋白氮，SDS测定蔗糖酶中蛋白质的相对分子质量。结果 通过这一阶段性的综合实验，学会了提取及初步提纯酶及胞内酶的提纯，酶活力的测定方法，蛋白质的测定方法和蛋白质相对分子质量的测定方法。通过这一系列的实验，使学生的实验好奇心得到了增强，提高了学生的动手能力，为将来进一步学习及实验打下基础。 关键词：蔗糖酶，Q Sepharose-柱层析法，酶活力，Folin-酚法，微量凯氏定氮法，SDS Abstract：Purpose To study the test technology invertase, do a series of experiments.with 20 grams of fresh beer yeast .Methods invertase extraction and purification, invertase preliminary purify - Q Sepharose - column chromatography, invertase vigor, the determination method for determination of Folin – Lowry protein content determination and invertase than vigor, trace kieldahl method of total protein measured invertase determination of nitrogen, SDSprotein invertase relative molecular mass. Results Through this stage of comprehensive experimental, learn preliminary extraction and purification of enzymes ,enzyme and intracellular purification, the determination method of enzyme activity, protein and protein determination method of the relative molecular mass. Keywords: invertase,;Q Sepharose - column chromatography, enzyme, Folin – Lowry; trace kieldahl method, SDS. 在浙江工业大学，《生物化学》实验课程每年都有开设。2010年2月的大二第二学期，我们生物技术专业的学生要求必修此门课程。在实验教材《生物化学技术实验指导》的指导下，学习测试与研究蔗糖酶的相关技术。其中从蔗糖酶的提取及初步提纯开始，进一步到蔗糖酶的纯化——Q Sepharose-柱层析法，蔗糖酶活力的测定，Folin-酚法测定蔗糖酶蛋白质含量测定及比活力计算，微量凯氏定氮法测蔗糖酶中总蛋白氮，SDS测定蔗糖酶中蛋白质的相对分子质量。这一系列实验均比较基础，给我们的将来的实验奠定了技术上的支持。 实验1. 蔗糖酶的提取及初步提纯 1.1材料与方法 1.1.1试剂 ①新鲜的啤酒酵母（冰冻在冰箱内，由实验室从啤酒厂买来）； ②醋酸钠（AR）； ③甲苯（AR）； ④4mol/L醋酸； ⑤95%乙醇（-20℃）； ⑥0.5mol/L Tris-HCl pH7.3缓冲液。称取121.1g Tris溶于1500ml的蒸馏水中，用4 mol/L HCl调节pH至7.3（HCl量约为230ml），用蒸馏水稀释到2L，即为0.5 mol/L Tris-HCl pH7.3缓冲液。 ⑦0.05 mol/L Tris-HCl pH7.3缓冲液：将0.5mol/L Tris-HCl pH7.3缓冲液稀释10倍即得。 注：整个实验要注意避免高温，以防止酶失活。 1.1.2器材 ①锥形瓶250ml（×1），50ml（×1）； ②量筒10ml（×1）25ml（×1）; ③烧杯100 ml（×1），1000 ml（×1）； ④具塞试管10 ml（×3）； ⑤吸球、玻棒、滴管、pH试纸； ⑥培养箱； ⑦恒温水浴箱； ⑧磁力搅拌器，搅拌子； ⑨高速冷冻离心机。 1.1.3操作方法 1． 酵母的自溶