毕业设计（论文）《SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法的改进》.docVIP

PAGE PAGE ii 编号： 　　　 本科毕业论文（设计） SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 染色方法的改进 学 院 生 命 科 学 学 院 专 业 生 物 科 学 学 号 姓　名 指导教师 职称 副教授 完成日期 年 5 月 目录 TOC \o 1-4 \f \h \z \u 摘 要 1 关键词 1 Abstract 1 Keywords 1 引言 1 1. 材料与方法 2 1.1 实验材料 2 1.1.1 试剂 2 1.1.2 主要仪器、设备 2 1.2 实验方法 2 1.2.1 溶液的配制 2 1.2.2 制胶 3 1.2.3 电泳 4 1.2.4 染色 5 1.2.4.1 传统考马斯亮蓝染色法 5 1.2.4.2 水浴加热法 5 1.2.4.3 微波炉加热法 5 1.2.5 染色结果观察 6 2. 结果与分析 6 2.1 染色效果与操作的简便性 6 2.2 不同染色方法凝胶成像结果 7 2.3 染色时间 7 3．结论与讨论 8 参考文献 8 致 谢 10 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法的改进 摘 要：针对传统的SDS- PAGE染色法耗时长，脱色所用甲醇有毒，乙醇会同时把考马斯亮蓝颜色脱去，使蛋白质条带不清晰等问题，对常染法进行了改进。本文用水浴或微波加热处理，同时改变染色液和脱色液成分，用乙醇、蒸馏水代替甲醇，大大缩短了染脱时间，经过比较，认为改进后的水浴法所耗时间大大缩短，染色效果也较好。 关键词：SDS- PAGE；考马斯亮蓝；水浴法；染色；脱色 A Modified Method for SDSStaining Name： Sun Jingfang Student Number ：200740810235 Dvisor：Ji Yuntao Abstract: For the traditional SDStime-consuming staining, Coomassie brilliant blue color can be taken off by the ethanol used for bleaching, methanol is toxic,the protein bands is not clear, and other issues,an improved method for the common dyeing is coming.By using a water bath or microwave heat treatment, at the same time changing the composition of dyeing and bleaching liquid,ethanol,distilled water instead of methanol,reducing the time of dyeing off greatly.By comparision,that the bathing method improved reduces the time significantly, dyeing better. Keywords：SDS- PAGE；coomassie brilliant blue；water bathing ；staining； decolorization 引言 继人类基因组计划之后，蛋白质组学已经成为21世纪生命科学研究的热点，对蛋白质高分辨率的分离和准确鉴定变得至关重要。目前分离蛋白质的主要方法之一就是采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS- Polyacrylamide Gel Electrophoresis, SDS- PAGE），它的支持介质是三维网状的聚丙烯酰胺凝胶。在催化剂的作用下，单体丙烯酰胺（acrylamide，Acr）与N，N-甲叉双丙烯酰胺（N,N-methylene bisacrylsmide，交联剂 ，Bis）发生聚合反应，生成凝胶介质。由于不同蛋白质分子大小和所带电荷的不同，从而对蛋白质进行分离，而分离后的电泳凝胶检测的染色方法也有多种，其中考马斯亮蓝染色法由于具有很强的特异性、较少的干扰因素、操作简便等优点，而成为蛋白质电泳检测和定量分析的一种常用方法。常用的考马斯亮蓝有G-250，R–350，和R-250三种，在游离状态下，考马斯亮蓝G-250为红色，其