除草剂咪唑乙烟酸水稻抗性基因地克隆、表达载体构建与初步应用.pdfVIP

目录 目录 第一章引言……………．…………………．……．1 第一节水稻田杂草稻概况……．……………………………1 1．1．1杂草稻起源及特征………．………………………………1 1．1．2杂草稻的危害．．．………．．．．．……．．．．…………．．………2 1．1．3杂草稻的防除………．．．．………．……………．．………．2 第二节除草剂概况……………．…………………………2 1．2．1除草剂的类别…………………………………………．．2 1．2．2以ALS为靶标的除草剂研究……．．………．．……．…………4 第三节抗除草剂作物的研究………………………………．．7 1．3．1抗除草剂作物的研究现状及意义……………………………．7 1．3．2抗以ALS为靶标除草剂的主要作物…．．………………………7 1．3．3作物除草剂抗性产生机制．………．．………………………．8 1．3．4抗除草剂转基因作物的发展前景……………………………10 第六节研究内容和意义…………………………………．．11 第二章材料与方法………………………………．．12 第一节材料…………………………………………．．12 2．1．1实验材料……………………………………………．．12 2。1．2质粒及菌株…………………．．………………………．12 2．1。3培养基成分及配置方法…………………………………．．12 2．1．4植物基因组DNA提取试剂及配制方法………………………．．14 2．1．5质粒提取相关试剂的配制…………………………………15 2．1．6电泳溶液的配制…．．．…………………………………．．15 2．1．7分子生物学试剂及相关引物………………………………．15 第二节实验方法………………………………………．．16 Ill 目录 2．2．1四种材料对咪唑乙烟酸耐受性的测定方法……………………．16 2．2．2浮萍对咪唑乙烟酸耐受性的测定方法………………．………．18 2．2．3水稻DNA的提取方法一-CTAB法……………．………………18 2．2．4大肠杆菌质粒的提取(碱裂解法)…………．………………19 2．2．5PCR反应．．…．．……．………．……．……．．．．．．．．．．．．…．20 2．2．6目的DNA片段的回收…．………．…………．．…．．．．．．．．…．20 2．2．7连接反应及其它修饰酶反应………．………………………2l 2．2．8大肠杆菌感受态细胞的制备………………………………．2l 2．2．9质粒或连接产物向大肠杆菌感受态细胞的转化…………………22 2．2．10水稻无菌苗种子消毒及培养……………．………………．．22 2．2．11温汤杀雄杂交．．．……………………．……．．………．．．23 第三章结果与分析．．………………………………24 第一节咪唑乙烟酸对浮萍根系和植株生长的影响……．…………24 3．1．1咪唑乙烟酸对浮萍根的影响………………………………．24 3．1．2咪唑乙烟酸对浮萍生长的影响……………………………．．25 3．1．3小结．．．…．．…………………………………………．25 第二节咪唑乙烟酸对水稻及杂草稻生长的影响…………………26 3．2．1室内初筛……………………………………．………．26 3．1。2盆栽试验……………………．………………………．29 3．2．3大田筛选……………………．………………………．31 3．2．4小结．．．…………．…．…．．…………………………．．32 第三节抗性ALS基因的克隆及序列分析………………………33