EBER检测试剂盒(原位杂交).docVIP

免费免费 PAGE 免费免费 EBER检测试剂盒（原位杂交） （操作之前请详细阅读此说明书） ? 检测原理和意义 EBER是EB病毒编码的小RNA，是EB病毒的表达产物，在EB病毒感染的细胞核中以高拷贝数存在。根据EBER的特有序列设计的EBER单链 DNA探针能特异地与EBER靶序列互补、杂交，从而检测EB病毒是否存在。此方法检测石蜡组织切片中的EB病毒具有极高的特异性和灵敏性。目前EBER原位杂交已成为组织和细胞中EB病毒的标准检测方法，在国际上广为使用。 ? 试剂盒提供的材料和试剂 成 份 保存方法 提 供 量 20人份 50人份 1 EBER杂交液 -20 400ul 1.0ml 2 蛋白酶K 4 40ul 100ul 3 一抗 4 1ml 2.5ml 4 二抗 4 1ml 2.5ml 5 HRP聚合物 4 1ml 2.5ml 6 DAB底物 4 1ml 2.5ml 7 DAB 4 20ul 50ul 8 18X18mm盖玻片 4℃ 20片 50片 9 湿盒增效液 4℃ 30ml 30ml （注意：EBER杂交液请 -20 免费免费 ? 用户自备材料和试剂 1. 55℃恒温 8. 二甲苯 2. 37℃恒温 9. 酒精 3. 光学显微镜 10. PBS(pH=7.6) 4. 移液器 11. 苏木素 5. 计时器 12. 氨水 6. 玻片染色缸和染色架 13. 盐酸酒精 7. 湿盒2个 ? 实验前需配试剂 30％湿盒增效液 取湿盒增效液及蒸馏水，按3:7配制成30%湿盒增效液备用。 ? 实验时需配试剂 A、1X蛋白酶K 将蛋白酶K与1×PBS按1：25的比例配制备用。（现配现用） B、DAB显色液 依据需要配制DAB显色液，以可覆盖整个组织的量为宜。取DAB与DAB底物，按照1：50的比例混匀，避光保存备用。(现配现用) ? 操作步骤 1．切片处理：将4um厚度的组织粘附在APES处理的载玻片上，切片于60-70℃烘烤60分钟以上。（建议每次实验同时附加阳性、阴性对照片） 2．脱蜡及水化： 溶液 次数×时间（分） 二甲苯 3 × 10 100%酒精 1 × 3 95％酒精 1 x 3 80%酒精 1 × 3 蒸馏水 1 x 3 （注意：使用过的二甲苯，应相应延长脱蜡时间，以保证脱蜡完全） 3．蛋白酶K消化：甩干切片, 将组织周围液体用滤纸吸干, 每张切片滴加适量1×蛋白酶K工作液(约50 ul，根据组织大小增、减量), 室温孵育5分钟。蒸馏水洗涤1×1分钟，小心擦干组织周围液体。 4．杂交： 4.1 每张切片滴加适量杂交液(约20 ul，根据组织大小增、减量)，并加盖玻片（本试剂盒配备，可根据加入杂交液量进行剪裁）； 4.2 放置水湿盒中，55℃恒温箱孵育60-90分 4.3 转至37℃孵育4-16 小时（放置于30%湿盒增效液湿盒中）。建议过夜（＜16小时） 4.4 48℃（PBS 预温）浸泡切片，小心移去盖玻片，继续浸泡5 4.5 48℃ PBS洗涤3x 5分钟 (轻微振荡容器) （注意：盖玻片规格应与杂交液量匹配，切片在整个试验过程中要保持湿润状态，防止干片） 5．信号放大与显色： 5.1 小心擦去组织周围液体，滴加适量一抗(约50 ul，根据组织大小增、减量)，37℃，水湿盒中孵育30分钟；37℃ PBS浸泡3x2分钟 5.2 小心擦去组织周围液体，滴加适量二抗(约50 ul，根据组织大小增、减量)，室温，水湿盒中孵育20分钟；室温PBS浸泡3x2分钟 (轻微振荡容器)； 5.3 小心擦去组织周围液体，滴加适量HRP聚合物(约50 ul，根据组织大小增、减量)，室温，水湿盒中孵育30分钟；室温PBS浸泡3x2分钟 (轻微振荡容器)。 5.4 小心擦去组织周围液体，滴加适量DAB显色液(约50 ul，根据组织大小增、减量)，室温，水湿盒中孵育约10分钟（不同样本的显色时间可能有所差别，建议镜下观察显色过程）；室温PBS浸泡3x2分钟 (轻微振荡容器)。 5.5 自来水冲洗，苏木精复染（可用盐酸酒精分化及氨水返蓝）。梯度酒精脱水，中性树胶封片。 ? 阳性结果判断标准：仅为细胞核着色。胞浆和胞膜着色不能视为阳性，只有当核分裂时可以出现胞浆阳性着色。 ? 其他事项： 本试剂保质期为12个月。客户在收到产品时请及时检查，如发现有外包装破损、试剂盒成分不全等产品问题，或者在使用过程中有任何疑问，请及时与泰普客户服务中心联系，我们将及时为您解决。 ? 公司信息： 公司名称：福建泰普生物科学有限公司 总部：福建省福州市金山金洲北路7号金山科技企业孵化器7号楼4层 邮编：350002 电话：800-804-8333，0591-2805 3600