常用培养基的制备.ppt

技能训练 常用培养基的制备 熟悉培养基制备的基本程序 会制备常用的培养基 实训目标 高压蒸气灭菌器、电热干燥箱、电炉、天平、量筒、漏斗、试管、培养皿、烧杯、三角烧瓶、等 仪器材料 方法步骤 （一）肉汤培养基 （二）琼脂培养基 （三）半固体培养基 （四）血液琼脂培养基 制备培养基 方法步骤 计算 称量 溶化 调PH 分装 灭菌 无菌检验 备用 （一）肉汤培养基 （二）琼脂培养基 （三）半固体培养基 （四）血液琼脂培养基 （一）肉汤培养基 1．成分 牛肉膏3～5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml。 2．制法 将牛肉膏、蛋白胨、氯化钠加蒸馏水后，加热溶解。矫正pH至7.4～7.6，过滤分装。置高压蒸气灭菌器内，121.3℃灭菌20min即成。 3．用途 可供一般细菌生长，同时也是制作一般培养基的基础原料。供营养要求较高的细菌分离培养，亦可供溶血性的观察和保存菌种。 （二）固体琼脂培养基1．计算： 1000 ml蒸馏水中应加营养琼脂粉31.3g，再根据培养基的需要量确定营养琼脂粉的用量。 营养琼脂粉的量=31.3×15×n/1000 （g） 其中： 15代表一个平板需要营养琼脂约15 ml； n代表要做的培养基平板的数量 2．称量： 用普通天平准确称量出营养琼脂粉的量，用量筒量出相应的 蒸馏水的量，要尽量准确。 3．溶化： 将营养琼脂粉和蒸馏水倒入搪瓷缸中，于电炉上加热溶化，边加热边搅拌，沸腾时立即从电炉上拿下，等泡沫消失后再放在电炉上加热，注意不能让琼脂溢出，煮沸2—3次。 4．分装：倒平板或倒试管 若做平板培养基应倒于培养皿中，每板约15ml左右，以刚好覆盖平皿底为易。 若做斜面培养基应倒入试管中，量为试管的1/3 包扎： ◇加塞后，试管通常每7支一起，包上一层牛皮纸或两层报纸，用线绳扎紧。三角瓶加塞后也用牛皮纸包扎。 ◇以活结形式扎紧，以便使用时容易解开。 ◇用记号笔注明培养基名称、配制日期、配制人或实验组。 灭菌时包牛皮纸 5．灭菌：用高压灭菌器灭菌 包扎好，直立放入内筒中，在121.3℃灭菌20-30min。 灭菌完毕后，将平板培养基拿出平放于桌面，凝固前勿动；将试管培养基摆成斜面，凝固前勿动。 6．无菌检验： 随机抽取几个平板或试管培养基于温箱中培养24小时，若无菌 生长则为合格。 7．备用： 将合格的培养基放入冰箱，在0-4℃中保存备用。 （三）半固体培养基 肉汤培养基中加入0.3%～0.5%琼脂粉制成，用于菌种的保存或观察细菌的运动性。 （四）血液琼脂培养基 将灭菌的营养琼脂冷至45～50℃，以无菌操作，加入5%～10%的无菌血液（或脱纤维血），然后倾注平皿或分装试管制成斜面。 课后作业 1.写出实习报告； 2.掌握普通营养琼脂培养基的制备过程 谢 谢！ 放映结束 感谢各位批评指导！ 让我们共同进步