微生物检验与控制PPT课件.ppt

USP〈1116〉 洁净室和其它控制环境的微生物评估 接触板得取样面积： 24～30cm2 ISO 14698 洁净室及其相关控制环境 取样面积：不小于20cm2 。 取样方法： 采样时培养基表面应与采样点接触不少于10s，向整个接触表面施加恒定均匀的压力（如施加的质量约为25g/cm2），不得有环形或线性运动，装置有接触并拿开后，要加盖并尽快用适当的培养条件培养。 洁净环境微生物检测：方法确认 目前各类官方的指导原则中，很少有对洁净环境微生物监测测试方法提出要求的。 目前各类官方的指导原则中，各种微生物只有生长在如下两种固体表面上的测试方法：琼脂培养基和滤膜，才能够得到确认。 关键区域环境监测培养基： TSA TSA+吐温80+卵磷脂 TSA+酶 结论 环境监控是一种重要的方式，以保证洁净室或无菌生产区域受到适当水平的控制 监测室定性的活动，即使应用于无菌生产这种最关键的活动中，批产品接受与否的结论也不应该仅仅依赖于环境取样的结果 结论 本质上没有人员操作的环境通常在起始阶段即仅有非常低的污染率，并在使用中维持非常低的微生物污染率 然而，人类介入的洁净室情况完全不同。研究显示，即使人员非常小心并正确着装，操作员还是会不断地将微生物带入环境 因此，期望始终看到环境结果为0，即使在关键区域或关键表面上，也是不合理的 结论 洁净室操作人员，尤其是参与无菌生产的人员必须努力维持适当的环境质量，并不断改进人员操作和环境控制 无菌生产机检测中介入人员的减少及去除，将减少微生物污染的风险，从而提高产品安全 目标始终是把污染的发生率降至最低水平 结论 在无菌生产中保证产品安全的唯一方式是通过彻底的培训，遵守严格的纪律，监督和限制人员对关键区域的接触，将风险降到最低 我们必须通过系统性地去除污染风险来建立生产的质量 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 * * 表面微生物取样点设置 取样点 设置原则 设备表面 是否与产品接触 墙面 距离地面高度约1.2-1.5m处 地面 房间中央，人员活动较多处 洁净服表面 袖口，肘部，胸前等 环境监测培养基的选择…… 微生物总数 细菌数：在细菌培养基上菌落形成单位的平均数。 真菌数：在真菌培养基上菌落形成单位的平均数。 微生物总数 = 细菌数 + 真菌数 细菌、真菌培养基： 中国药典 欧洲药典 细菌 营养琼脂 30～35℃ 3天 TSA 30～35℃ 5天 霉菌、酵母菌 玫瑰红钠琼脂 23～28℃ 5天 SDA 20～25℃ 5天 酵母菌 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂 23～28℃ 5天 / GB/T 16293-2010 GB/T 16294-2010 采用大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）配制的培养皿经采样后，在30 ℃ ～35℃ 培养箱中培养，时间不少于2d； 采用沙氏培养基（SDA）配制的培养皿经采样后，在20 ℃ ～25℃ 培养箱中培养，时间不少于5d。 微生物计数的困惑 ！ 细菌培养基上生长的真菌如何计数？ 真菌培养基上生长的细菌如何计数？ 总好氧微生物数（TAMC）： 定义：在TSA（大豆酪蛋白琼脂）培养基上 生长的包括真菌的菌落形成单位总的 数量。 培养温度/时间： 1、细菌： 30～35℃ 5天。 2、细菌： 30～35℃ 2天； 霉菌或酵母菌： 20～25℃ 3天。 酵母菌和霉菌总数（TYMC）： 定义：在SDA（沙氏葡萄糖琼脂）培养基上 生长的包括细菌的菌落形成单位总的 数量。 培养温度/时间： 20～25℃ 5天。 计数原则： 1、TAMC时，如果真菌被发现生长，应该被 作为TAMC计数的一部分。 2、TYMC时，如果细菌被发现生长，应该被 作为TYMC计数的一部分。 3、当TYMC由于细菌的生长而超过了可接受 标准，应当使用含有抗生素的SDA培养基。 培养条件： CHP2010 《中国药典》2010年版 二部 附录XIX Q “药品微生物实验室规范指导原则” 用于环境监测的培养基须特别防护，最好要双层包装和终端灭菌，如果不能采用终端灭菌的培养基，那么在使用前应进行100%的预培养以防止外来的污染物带到环境中以避免出现假阳性的结果。 1117 微生物良好实验室规范 USP 1116 MICROBIOLOGICAL EVALUATION OF CLEAN R