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基因探针 ——分子杂交技术 基因探针 基因探针，即核酸探针，是一段带有检测标记，且序列已知的，与目的基因互补的核酸序列(DNA或RNA)。 分子杂交技术的分类 根据其检测对象不同，可分为 检测对象 探针 Southern杂交 DNA 核酸 Northern杂交 RNA 核酸 Western杂交 蛋白质 抗体 基本操作程序 印迹 将样品在凝胶上分离，然后将样品通过“影印”的方式转移到固相支持物上（如滤膜）。 杂交 将已印迹有样品的滤膜与带有放射性标记或其它标记的探针进行杂交。 结果检测 通过放射自显影或显色反应，判断样品中是否有与探针同源的分子。 Southern杂交 检测样品DNA的处理 电泳分离及变性处理 转移并固定到滤膜上 探针的制备及杂交 检测与分析 检测样品DNA的处理 提取检测样品的基因组DNA 用限制性内切酶对其进行酶切，至大小不同的DNA片段 电泳分离及变性处理 琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段 变性处理 通常DNA变性的方法：热变性、酸碱变性、化学试剂变性 在0.4M NaOH碱性条件下变性 凝胶 0.4M NaOH 转移并固定到滤膜上 通过毛细管虹吸法，将凝胶上的DNA转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜上。最后通过紫外线照射将DNA固定在滤膜上。 转移的方法 毛细管虹吸法、电转移法、真空转移法 探针的制备 一、探针的合成 PCR、化学