人胰淀素类似物普兰林肽体外活性测定方法的建立-中国药科大学.PDFVIP

学 报 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２０１２，４３（４）：３５５－３６０ ３５５ 人胰淀素类似物普兰林肽体外活性测定方法的建立 １ ２ ２ １，３ １，３ １，３ １，２，３ 王欢歌 ，肖　雪 ，胡　浩 ，苏志坚 ，项　琪 ，张齐好 ，黄亚东 １ ２ （暨南大学 生物医药研究院；基因工程药物国家工程研究中心； 　 ３广东省生物工程药物重点实验室，广州５１０６３２） 摘　要　建立体外人胰淀素类似物普兰林肽活性测定的方法，为普兰林肽及其制剂的质量控制提供可靠的细胞检测 方法。将Ｌ６细胞培养并分化成有明显肌管的成熟骨骼肌细胞，采用葡萄糖氧化酶过氧化物酶法（ＧＯＤＰＯＤ）检测普兰 －９ －５ 林肽对高糖培养环境下骨骼肌细胞葡萄糖吸收的影响。结果显示，在 １×１０ ～１×１０ ｍｏｌ／Ｌ的浓度范围内，普兰林肽 能显著增加分化后的Ｌ６细胞的糖吸收量，在 １６ｈ达到最大值。普兰林肽浓度的负对数（ｘ）与细胞糖吸收增加量（ｙ）间 ２ 呈现出良好的线性关系（ｙ＝－４７５０ｘ＋５９５４，Ｒ ＝０９９１９）。应用本实验建立的方法检测了市售普兰林肽醋酸盐注射 －６ －７ －８ 剂的活性，结果显示１×１０ 、１×１０ 和 １×１０ ｍｏｌ／Ｌ的普兰林肽注射剂作用于分化的Ｌ６细胞 １６ｈ，细胞的糖吸收增 加率为（６１８９±９５４）％，（４３６８±１００６）％和（３３３０±１３０３）％（Ｐ＜００１）；与单用胰岛素组对比，普兰林肽与胰岛 素联合使用能显著提高分化后的Ｌ６细胞的糖吸收量（Ｐ＜００５），与普兰林肽注射剂的临床使用结果一致。本实验为普 兰林肽的活性测定提供了一种稳定可靠的细胞替代模型。 关键词　普兰林肽；人胰淀素类似物；Ｌ６细胞；活性测定 中图分类号　Ｒ５８７１　　文献标识码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２０１２）０４－０３５５－０６ Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆａｎｉｎｖｉｔｒｏｍｅｔｈｏｄｔｏｍｅａｓｕｒｅｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｈｕｍａｎａｍｙｌｉｎ ａｎａｌｏｇｕｅｐｒａｍｌｉｎｔｉｄｅ １ ２ ２ １牞３ １牞３ １牞３ ＷＡＮＧＨｕａｎｇｅ牞ＸＩＡＯＸｕｅ牞ＨＵＨａｏ牞ＳＵＺｈｉｊｉａｎ 牞ＸＩＡＮＧＱｉ牞ＺＨＡＮＧＱｉｈａｏ 牞 １牞２牞３ ＨＵＡＮＧＹａｄｏｎｇ １ ２ ３ ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ牷ＮａｔｉｏｎａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｏｆＧｅｎｅｔｉｃＭｅｄｉｃｉｎｅＧｅｎｅｔｉｃＭｅｄｉｃｉｎｅ牷ＧｕａｎｇｄｏｎｇＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＫｅｙ ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＭｅｄｉｃｉｎｅ牷ＪｉｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６３２牞Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｍｅａｓｕｒｉｎｇｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｈｕｍａｎａｍｙｌｉｎａｎａｌｏｇｕｅｐｒａｍｌｉｎｔｉｄｅｉｎｖｉｔｒｏｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ牞 ｗｈｉｃｈｃｏｕｌｄｐｒｏｖｉｄｅａｒｅｌｉａｂｌｅｃｅｌｌｍｏｄｅｌａｎｄｔｅｓｔｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆｐｒａｍｌｉｎｔｉｄ