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基因工程的基本操作程序
【典题分类精析】
考点一、目的基因的获取
例1.1993年,我国科学工作者培育成的抗棉铃虫的最新转基因抗虫棉,其抗虫基因来源于( )
A.普通棉花的基因突变 B.棉铃虫变异形成的致死基因
C.在棉铃虫体内寄生的线虫基因 D.苏云金芽孢杆菌体内的抗虫基因
分析:1993年,中国农业科学院的科学家成功地将原核生物苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因转入棉植株,培育成了抗棉铃虫的转基因抗虫棉。
答案:D
点评:目的基因主要来源是原核生物。
例2.镰刀型细胞贫血症的病因是血红蛋白基因的碱基序列发生了改变。检测这种碱基序列改变必须使用的酶是( )
A.解旋酶 B.DNA连接酶 C.限制性内切酶 D.RNA聚合酶
分析:本题考查的知识点是DNA分子杂交原理。选项B、 D可以直接排除。对于选A可能理解为的:既然是检测突变的部位,那么很自然想到用该基因的探针,进行碱基互补配对杂交而检测之(相关知识见教材鉴定人猿亲缘关系和基因工程处都有所涉及),但是分子杂交的前提必须是单链DNA,于是很自然想到用解旋酶处理被检测基因。但是,解开DNA双链结构不一定要用解旋酶,在高温或者用强碱溶液处理也可以得到单链DNA,而且题干上也有必须使用的酶的叙述,所以可以排除A选项。 对于C选项的理解:限制酶只是把原DNA切成很多片段,其中某个片段可能包含突变的目的基因,然后再用化学方法处理成单链,最后再和探针杂交,根据放射性(或荧光)出现部位而检测出突变部位,这种技术其实就是所谓的基因诊断。
如不用限制酶把DNA切割成若干片段,通过其他方法把DNA处理成单链,然后与DNA探针杂交,但是,已经变性成单链的DNA很有可能常温下复性,可能回折重新形成许多双链区,如果恰恰突变部位及其临近区域和该单链其他区域结合成双链,那么必然影响探针与相应部位的结合,也就无法准确检测到突变部位。
答案:C
点评:本题易错选A,用探针检测DNA,DNA必须解旋,但解旋不一定要用解旋酶,这一点可联系肺炎双球菌的转化实验,高温使DNA解旋。
考点二、基因表达载体的构建
例3.[2006高考江苏]基因工程又叫基因拼接技术。
(1)在该技术中,用人工合成方法获得目的基因的途径之一是:以目的基因转录的___________为模板,__________成互补的单链DNA,然后在酶的作用下合成__________。
(2)基因工程中常用的受体细胞有细菌、真菌、____________。若将真核基因在原核细胞中表达,对该目的基因的基本要求是_________。
(3)假设以大肠杆菌质粒作为运载体,并以同一种限制性内切酶切割运载体与目的基因,将切割后的运载体与目的基因片段混合,并加入DNA连接酶。连接产物至少有_________种环状DNA分子,它们分别是_______________。
分析:本题考查的是基因工程的相关知识。熟练掌握基因工程的四个步骤是解答本题的关键。基因工程很容易与其他知识相联系命制综合题,如基因操作基本步骤中目的基因的获取常与“中心法则”、“碱基互补配对原则”相结合,还可与基因的结构、发酵工程、基因的遗传定律相结合进行综合考查,是学习和重点之一。完全按照人的意愿,由重新组装基因到新生物产生的生物科学技术,就称为“基因工程”,或者说是“遗传工程”。在基因工程中,人工合成目的基因的途径有两条,其中之一就是以信使RNA这模板经过反转录合成目的基因;基因工程常用的受体有细菌、真菌、动植物细胞;原核生物的基因中无内含子,若将真核生物的基因转入原核生物,需除去内含子部分;在本题操作过程中,若在含有同一种限制酶切割的运载体和目的基因混合物中,加入DNA连接酶将会形成3种环状DNA分子,运载体自连而成的环状DNA分子,目的基因自连而成的环状DNA分子,运载体与目的基因片段相连的环状DNA分子。
答案:(1)信使RNA(mRNA) 逆转录(反转录) 双链DNA(目的基因) (2)动植物细胞 除去内含子 (3)3 运载体自连的、目的基因自连的、运载体与目的基因片段相连的环状DNA分子
点评:解答该类题目的方法是熟练掌握课本知识,并对课本知识进行深化、拔高。
考点三、将目的基因导入受体细胞
例4.基因工程中科学家常采用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞,原因是( )
A.结构简单,操作方便
B.繁殖速度快
C.遗传物质含量少、简单
D.性状稳定,变异少
分析:本题考查基因工程的受体细胞。目的基因导入受体细胞后,随着受体细胞的繁殖而复制,由于细菌等微生物繁殖速度非常快。在很短的时间内就能获得大量的目的基因
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