实验一显微镜内部构造原理与使用.pptVIP

细胞生物学实验 刘小红 电话QQ：350783409 Email: 350783409@ 生命科学学科院 生物技术教研室 实验安排 实验一、显微镜的构造原理及使用方法 实验二、细胞凝集现象的观察 实验三、细胞膜的渗透性 实验四、叶绿体的分离及荧光现象的观察 实验五、线粒体的分离及观察 实验六、DNA的Fulgen染色法 实验七、植物细胞骨架的观察 实验八、RNA的Brachet反应 实验九、植物的组织培养 实验一 显微镜的构造原理及使用方法 一、普通光学显微镜Ordinary optical microscope （一）基本构造 （二）放大原理及光路图 （三）性能和质量 （四）使用方法 （五）使用注意事项 （一）基本构造 1、机械部分 （1）镜座 （2）镜柱 （3）镜臂 （4）镜筒 （5）转换器 （6）载物台 （7）调节器 2、照明部分 （1）反光镜 （2）聚光器 （3）光圈 3、光学部分 （1）目镜（5×，10×， 15×） （2）物镜（ 低：10×或 15×；高：40×或 45×；油 ：100×） （三）性能和质量 1、分辨率（resolution) 指能分辨出的相邻两个点间最小距离的能力。 r = 0.61λ / (n · sinα) r：分辨力； λ：照明光源的波长； n：介质的折射率； α：样品对物镜孔径角的半角； 0.61：恒定的参数。 注：n · sinα的量称为物镜的数值孔径，缩写为NA；r越小，则分辨率越高。要增大数值孔径，孔径角无法增大，只能增大介质的折高压率，这样就诞生了水浸物镜和油浸物镜，目前最大NA值可达1.4。 2、放大率（magnification) 指最终成像的大小与原物体大小的比值。 总放大率 = 物镜放大倍数 ×目镜放大倍数 空气介质：可达1000倍 油介质（通常是香柏油）：可达1400倍 （四）使用方法 1、用前的准备工作 （1）取显微镜；（2）完好性检查 2、低倍镜的使用 （1）准备；（2）对光；（3）放标本片 （4）调节焦距 3、高倍镜的使用 4、油镜的使用方法 5、使用练习 （五）使用注意事项 1、持镜时必须是右手握臂、左手托座的姿势，不可单手提取，以免零件脱落或碰撞到其它地方。 2、轻拿轻放，不可把显微镜放置在实验台的边缘，应放在距边缘10cm处，以免碰翻落地。 3、观察有液体的临时标本时要加盖片，以免液体污染镜头和显微镜。 4、粗、细调节钮要配合使用，不能过度调节，调时侧面注视镜筒下降，以免压坏标本和镜头。 5、保持显微镜的清洁，光学和照明部分只能用擦镜纸擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，机械部分用布擦拭。 6、水滴、酒精或其它药品切勿接触镜头和镜台，如果沾污应立即用擦镜纸擦净。 7、放置玻片标本时要对准通光孔中央，且不能反放玻片，防止压坏玻片或碰坏物镜。 8、要养成两眼同时睁开观察的习惯，以左眼观察视野，右眼用以绘图。 9、不要随意取下目镜，以防止尘土落入物镜，也不要任意拆卸各种零件，以防损坏。 10、使用完毕后，必须复原才能放回镜箱内，其步骤是：取下标本片，转动旋转器使镜头离开通光孔，下降镜台，平放反光镜，下降集光器(但不要接触反光镜)、关闭光圈，推片器回位，盖上绸布和外罩，放回实验台柜内。最后填写使用登记表。(注：反光镜通常应垂直放，但有时因集光器没提至应有高度，镜台下降时会碰坏光圈，所以这里改为平放) 二、常见特殊显微镜 （一）暗视野显微镜Dark ground microscope 1、原理 根据光学上的丁道尔（Tyndoll）现象，微尘细粒在强光直射通过的情况下，不能为人眼所见，这是因为光线过强及绕射现象等因素，因而看不到微尘的形象。若把光线斜射它们，则由于光的反射或衍射的结果，微尘细粒似乎增大了体积，而为人眼可见。 据此原理，使光不直接通过样品而是斜射到样品上，即可在暗视野下观察细微粒子。 2、构造及光路 3、应用及使用注意事项 能观察到0.2～0.004 μm的亚微颗粒，适合观察活细胞内的细胞核、线粒体、液体介质中的细菌和霉菌等。 暗场镜检要求载玻片和盖玻片必须无疵痕而无尘土，物镜前透镜也必须清洁无尘。 载玻片与盖玻片的厚度应符合标准，载玻片太厚，则聚光聚的焦点落在载玻片内，而达不到被检物体的平面上，盖玻片太厚，在使用油镜头的情况下，由于物镜的工作距离很短，甚至无法调焦，而看不到或看不清被检物体。 水稻花的暗视野显微镜图片 （二）相差显微镜Phase contrast microscope 1、原理 由于细胞不同部位的折射率不同，当光通过细胞的不同部位时有不同程度的滞后，这样就产生了相位差。