酶工程制药（医学）.ppt

酶工程制药 ;第一节 概述;;一 、酶的基础知识;;必需基团：这些基团若经化学修饰使其改变，则酶的活性丧失。;二、现代酶工程的主要内容：;;三、酶的来源;;目前常用的产酶微生物;;四、酶在医药领域的应用;;;;;抗炎净创类：目前在治疗上发展最快，用途最广的一种。 多数是蛋白质水解酶，分解发炎部位纤维蛋白的凝结物，消除伤口周围的坏疽、腐肉和碎屑。 其中有些酶能够分解脓液中的核蛋白使成简单的嘌呤和嘧啶，降低脓液的粘性、达到净洁创口、消除痴皮、排除脓液抗炎消肿的目的。 主要有胰蛋白酶、糜蛋白酶、双链酶，α-淀粉酶、胰脱氧核糖核酸酶等。 ;血凝和解凝类：这类酶都是从血液中提取出来的。 凝血酶的作用是促使血中纤维蛋白元变成不溶性纤维蛋白,从而促使血液凝固，防止微血管出血。 纤维蛋白溶解酶的作用是溶解血块，为目前临床上最新的一种酶制品,治疗血栓静脉炎、冠状动脉栓塞等。 抑肽酶作为肽酶抑制剂，广泛应用于体外循环手术，大剂量抑肽酶可明显减少心脏外科手术后的渗血，消除因心脏外科手术后渗血而导致的死亡 ;20;凝血酶;;;24;25;;1、细胞破碎 2、酶的提取 3、酶的分离方法 4、酶的组合分离纯化策略 5、酶的浓缩、干燥与结晶 ;一、酶的分离纯化技术路线;二、酶的提取;;（二）酶的抽提;(三）沉淀分离;三、酶的纯化;; 2、固定化酶的特点;36;（1）载体结合法：将酶结合于不溶性载体上的固定化方法。 A.物理吸附法：用物理方法将酶吸附于不溶性载体上的固定化方法。活性碳,多孔玻璃,树脂等 优点：操作简单，可选用不同电荷和不同形状的载体，有可能固定化和纯化过程同时实现，酶失活后载体仍可再生。 缺点：最适吸附酶量无规律可循，吸附量与酶活力不一定呈平行关系，酶与载体结合力不强，酶易于脱落，导致酶活下降并污染产物。 ; B、离子结合法：酶通过离子键结合于具有离子交换基的水不溶性载体上。DEAE-纤维素等 优点：操作简单，处理条件温和，酶的高级结构和活性中心的氨基酸残基不易被破坏。 缺点：载体和酶的结合力弱，易受缓冲液种类或pH的影响，离子强度高时，酶易脱落。;;（2）交联法：用双功能或多功能试剂使酶与酶或细胞与细胞之间交联的方法。交联法又分：交联酶法、酶与辅助蛋白交联法、吸附交联法和载体交联法。常用的交联剂：戊二醛、双重氮联苯胺-2、2-二磺酸、1,5-二氟-2,4-二硝基苯。;酶分子之间共价交联和与水不溶性载体共价偶联 酶分子；（a）酶分子之间用双功能基团的化学交联试剂相互交联成水不溶性的固定化酶；（b）酶分子被偶联到水不溶性载体上形成水不溶性的固定化酶;（3）包埋法：;;;（二）新型的酶固定化方法;;（三）固定化细胞的方法;2、固定化细胞的制备技术;（3）交联法制备技术：由于所用交联剂戊二醛等对细胞有毒性，一般很少用。 （4）无载体法制备技术：靠细胞自身的絮凝作用制备固定化细胞的技术。通过助凝剂或选择性热变性的方法实现细胞的固定化。 此外还有粘合法，截留法等 ;（四）常用的固定化酶载体材料;;;;; ;4、载体的选择;二、固定化酶（细胞）的性质与指标;（3）膜状固定化酶：可通过共价结合的方法将酶偶联在滤膜上。也可用其他方法制膜酶。酶膜比表面积大，渗透阻力小，可用于酶电极，破碎后也可用于填充床。目前已有木瓜酶、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、脲酶等酶膜。 （4）管状固定化酶：又称酶管，利用管状载体如尼龙、聚氯苯乙烯和聚丙烯酰胺，经活化后与酶偶联得酶管。酶管的机械强度大，切短后可用于填充床反应器，也可组装成列管式反应器。目前已制备出糖化酶、转化酶、脲酶 等酶管。;2、固定化酶的性质 （1）酶活力的变化：酶经过固定化之后活力大都下降。其原因主要是酶活性中心的重要氨基酸与载体发生结合，酶的空间结构发生变化或酶与底物结合时存在空间位阻效应。包埋法中还有底物与产物扩散阻力增大。 （2）酶稳定性的变化：包括对温度、pH、蛋白酶变性剂和抑制剂的耐受程度。固定化后，稳定性提高，有效寿命延长。其原因是限制了酶分子之间的相互作用，阻止了其自溶，增加了酶构型的牢固程度。;;A、操作稳定性：通常半衰期达到1个月以上时，即具有工业应用价值。 B、贮藏稳定性：一般不能长期贮存，现做现用，否则活力逐渐下降。若需长期保存，可在贮存液中添加底物、产物、抑制剂和防腐剂，并于低温保存。 C、对蛋白酶的稳定性：大多数天然酶经固定化后对蛋白酶的耐受力有所提高。可能的原因是由于空间位阻效应使蛋白酶不能进入固定化酶内部。;（3）酶学特性的变化 A、底物专一性：对底物的专一性下降。 B、最适pH：最适pH可能变大，也可能变小；pH-酶活曲线可能发生变化，其变化与酶蛋白和载体的带电性质有关。