法舒地尔在大鼠视神经损伤中的保护作语用及对et-1和hif-1α的表达影响.docxVIP

；g：lt：医科大学 ；g：lt：医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 鼢蚴‘豸中燧茕q瑚缫鬣占 j 一、．． 河北医科大学研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了 文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写， 文责自负。 研究生答名：7易膨 导师签章：／钐历 yⅡ’年弓月门日 万方数据 IIIIllllllll IIIIllllllll llllllllllllqMIIIIIIllllllllhllI 目 录 Y2785032 中文摘要 l 英文摘要 5 英文缩写 l O 研究论文法舒地尔在大鼠视神经损伤中的保护作用及对ET-1和HIF．1仅 的表达影响 前言日IJ舌 ． 1 1 材料与方法 ．．12 结果 ．1 6 附图 1 8 附表 ．．33 讨{念 ．34 结{仑 ．38 参考文献 - 39 综述法舒地尔在神经保护领域的新进展 42 致谢 52 个人简历 53 万方数据 中文摘要法舒地尔在大鼠视神经损伤中的保护作用及对ET-1和HIF一1 中文摘要 法舒地尔在大鼠视神经损伤中的保护作用及对ET-1和HIF一1 Q 的表达影响 摘 要 目的：视神经损伤再生及功能的恢复是眼科学临床科研亟待解决的难 题，它是眼科疾病中致盲的主要病因之一。临床有许多研究证明视神经损 伤后主要病理改变是视网膜神经节细胞(Retinal ganglion cells，RGCs)轴 索发生渍变，导致轴浆运输障碍最终使视网膜神经节细胞的水肿和凋亡 【l】。因此目前的研究多集中在预防和减缓视网膜神经节细胞的凋亡和促进 其再生两个方面。现阶段多局限在药物治疗为主，但是因许多药物的副作 用和局限性，限制了在眼科的应用。所以当下如何寻找到一种不良反应少， 而且对视神经有保护作用的药物成为世界眼科所面临的一个瓶颈。法舒地 尔作为一种Rho激酶(Rho．associated kinase，ROCK)抑制剂主要作用于抗 血管的痉挛，适用于多种原因引起心脑血管的缺血性病变，主要变现在： 缺血性脑卒中，短暂性脑缺血，基底动脉供血不足及缺血，蛛网膜下腔出 血后引起的迟发性脑血管病，颅脑外伤后及治疗当中引起的脑血管的痉 挛，脑出血后的修复期。目前有临床研究证明在脑损伤中法舒地尔可有效 的抑制自由基的产生，改善脑血流量，并且对双侧阵发性颈总动脉痉挛引 起的大鼠脑缺血后的继发性神经细胞损伤有抑制作用，保护神经元细胞。 由近期研究来看法舒地尔己成为神经保护类药物的新的热点，但是对视神 经的保护还罕有报道。 本实验是制作大鼠视神经不完全损伤模型，通过观察视神经损伤后， 未经处理的大鼠视网膜HE染色形态学改变，免疫组织化学染色半定量检 测阳性细胞计数内皮素．1(Endothelin．1，ET-1)、缺氧诱导因子 一l a(Hypoxia-inducible factor-1 a，HIF．1 a)的表达状况，和腹腔注射法舒地尔 后两者问的变化趋势。探讨法舒地尔在视神经损伤保护中的意义，旨在临 床应用中提供实验和理论依据，从而为将来研究拓展新思路。 方法：选取雄性SD大鼠60只作为研究对象，确保清洁及健康，质量 (200土10)g(购买于河北医科大学动物实验中心)，并对其外眼和眼底进 行检查，正常者进入实验。随机进行分组：其中正常组12只大鼠双眼(24 万方数据 中文摘要只)，生理盐水组即对照组24只大鼠单眼(24只)，法舒地尔组即治疗组 中文摘要 只)，生理盐水组即对照组24只大鼠单眼(24只)，法舒地尔组即治疗组 24只大鼠单眼(24只)。不对正常组进行任何处理，治疗组和对照组均进 行视神经钳夹法建立右眼视神经不完全损伤模型，分别对治疗组和对照组 腹腔注射法舒地尔10mg／kg和等量的生理盐水，每目一次。分别于实验3 天，7天，14天，’21天摘除大鼠右眼球，随机抽取正常组3只大鼠摘除 双眼(6只眼)，治疗组和对照组分别随机各抽取6只大鼠摘除单眼(共 12只眼)，固定，包埋，切片，制备标本。以视盘上2mm范围内的视网 膜作为观察对象，其中视网膜组织HE染色在光镜下观察视网膜细胞形态 和数量的变化；免疫组织化学染色中观察视网膜组织中ET-1和I／IF．1 Q 的表达变化，计算机图像分析技术半定量检测视网膜组织中ET-1和 HIF．1a的平均光密度值(Average optical density,AOD)，以免疫染色阳 性AOD值来表示抗原表达量，AOD值越高则阳性表达越强。实验结果均 为正太分布计量资料，数据采用统计结果以均数±标准差表示，实验数据 用SPSSl3．0统计软件分析，同一组内的不同时间