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Chapter 6 Enzymatic catalysis  in Non-aqueous system 酶的非水相催化 教学目标：掌握非水相中酶的催化特性及反应条件的选 择与控制方法。 教学要求：了解酶催化反应的介质及其特点；理解有机介质 中水和有机溶剂对酶催化反应的影响；掌握非水相中酶 的催化特性及反应条件的选择与控制方法。 重点：非水相中酶的催化特性及反应条件的选择与控制。 难点：有机介质中水和有机溶剂对酶催化反应的影响。 Contents of chapter 6 6.1 酶催化反应的介质 酶催化反应的介质 Hill.A.C(1898)J.Chem.Soc,73,634-658 Kastlc,J.C.and LocvCnhart,A.a.(1900)Am Chem,J,24,491-525 Sym,E,A(1933)Biochem,Z,258,304-324 Sym,E,A(1936)Enzymologia 1,156-160 Klibanov 的实验 酶催化反应的介质 Zaks,A. and Klibanov,A.M(1984),Science224,1249-1251 ZaKs,A. and Klibanov,A.M.(1985),Proc.Natl,Acad,Sci. u.s.a. 82,3192-3196. 酶非水相催化的类型 酶非水相催化的类型 6.2 有机介质反应体系 非极性有机溶剂?酶悬浮体系(微水介质体系) 用非极性有机溶剂取代所有的大量水，使固体酶悬浮在 有机相中。但仍然含有必需的结合水以保持酶的催化活性 (含水量一般小于2%)。 酶的状态可以是结晶态、冻干状态、沉淀状态，或者吸 附在固体载体表面上。 与水互溶的有机溶剂?水单相体系 有机溶剂与水形成均匀的单相溶液体系。酶、底物和产 物都能溶解在这种体系中。 非极性有机溶剂?水两相/多相体系 由含有溶解酶的水相和一个非极性的有机溶剂(高脂溶 性)相所组成的两相体系。 一、反应体系中水对酶催化反应的影响 天然酶都溶于水，只有在一定量的水存在的条件下，酶分子才能进行催化反应。所以酶在有机介质中进行催化反应时，水是不可缺少的成分之一。有机介质中的水含量多少对酶的空间构象、酶的催化活性、酶的稳定性、酶的催化反应速度等都有密切关系，水还与酶催化作用的底物和反应产物的溶解度有关。 酶分子只有在空间构象完整的状态下，才具有催化功能。在无水的条件下，酶的空间构象被破坏，酶将变性失活。故此，酶分子需要一层水化层，以维持其完整的空间构象。 有机介质中水的含量对酶催化反应速度有显著影响。存在最适水含量。 必需水 1、必需水概念 干燥酶的水合过程 ⑴ 与酶分子表面带电基团结合达到0-0.07g水/g酶； ⑵ 与酶分子表面的极性基团结合(0.07-0.25g/g)； ⑶ 凝聚到酶分子表面相互作用较弱的部位（0.25-0.38g/g）； ⑷ 酶分子表面完全水化，被一层水分子覆盖。 2、酶活与水的关系： 酶活最大时——蛋白质结构的动力学刚性和热力学稳定性（柔性）之间达到最佳平衡点。 “刚柔并济” 3、影响酶必需水含量的因素（酶和溶剂） a．不同酶需水量不同 溶菌酶在含水量38%以上，即每个酶分子周围有300 个以上水分子，整个酶被一层单分子水层所包围，酶活性才能发挥。 在辛烷中糜蛋白酶催化仅需吸附50个水分子 脂肪酶仅需几个水分子就可显示出活性。 b.同一种酶在不同有机溶剂中最适反应需水量不同 溶剂疏水性越强，需水量越少。 4．表征必需水作用的参数---热力学水活度 水活度（water activity)：特定的温度和压力条件下，反应体系中水的摩尔分数 Xw与水活度系数гw的乘积： аw =гw× Xw гw是溶剂疏水性的函数，溶剂疏水性越大，гw越大。 аw 是一个强质性质的物理量，在平衡状态时，反应体系中各组分（酶、溶剂、底物和产物）的аw 是相同的。 研究水活度的意义 1、最佳水活度与溶剂的极性几乎无关，大约在0.55左右。 2、可以排除溶剂对最适含水量的影响。 3、水活度可由反应体系中水的蒸汽压除以在相同条件下纯水的蒸汽压而测得。 二、有机溶剂对酶催化反应的影响 常用的有机溶剂有辛烷，正己烷，苯，吡啶，丙醇，乙腈，二氯甲烷等。 1、有机溶剂对酶结构与功能的影响 在有机溶剂中，酶分子（经过修饰后可溶于有机溶剂者除外）不能直接溶解，而是悬浮在溶剂中进行催化反应。根据酶分子的特性和有机溶剂的特性的不同，保持其空间结构完整性的情况也有所差别。 酶在有机介质中与有机溶剂接触，酶分子的表面结构将有所变化。 当酶悬浮于有机溶剂中，有一