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类号 类号 密级 华中农业大学硕士学位论文 豆科植物中结瘤信号通路蛋白NSP2相互作用蛋白 IPN2的功能分析 FUNCTIoNAL ANALYSIS OF NODULATION SIGNALING PATHWAY 2 INTERACTIoN PRoTEIN IPN2 IN LEGUME 硕士研究生： 黄小琴 学 号： 2012304110024 指导教师： 张忠明教授 专业：微生物学 研究方向：共生固氮分子生物学 获得学位名称：理学硕士 获得学位时间：2015年6月 华中农业大学生命科学与技术学院 二O一五年六月 万方数据 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 殛 如需保密，解密时间 年 月 曰 是否保密 锣 声明 I删炒 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。尽我所知，酴了文孛特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他 入已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构． 的学位或证书而使用过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贾献均已在论文中做了骥确的说明，并表示了谢意。 研究生签名：巷_，琴 时阍：矽够年匆月}日 学位论文使用授权书 本人完全了解华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定，即学生必须按 照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版 和电子版，并提供目录检索和阕览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段 保存、汇编学位论文。本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、 传播学位论文的全部或部分内容，为存在馆际合作关系的兄弟高校用户提供文献 传递和交换服务，同时本人保留在其他媒体发表论文的权力。 注：保密学位论文(即涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在需要提交保 密的论文)在解密后适鳎予本授权书。 凇黼张营{，琴鼢张猢 签名日期：为l≮-年幻月 {日 签名日期：阳}$年 易月 }日 万方数据 豆科植物中结瘤信号通路蛋白NSP2相互作用蛋白IPN2的功能分析目 豆科植物中结瘤信号通路蛋白NSP2相互作用蛋白IPN2的功能分析 目 录 摘 要 ．．i Abstract ． ． ii 缩略语表 iv 1一前言日U吾 ．1．1 1．1共生固氮的意义 ．1 1．2根瘤的形成过程 ．1 1．3豆科植物中结瘤因子信号传导途径 ．3 1．3．1结瘤因子的感知 一3 1．3．2结瘤因子信号的级联放大 ．．4 1．3．3根瘤形成早期表皮和皮层的应答 6 1．3．4结瘤自主调控 一7 1．4结瘤起始基因和相关转录因子 ．．8 1．4．1结瘤起始基因NIN基因的结构与功能 ．8 1．4．2结瘤信号通路蛋白的结构与功能 9 1．4．3 MYB转录因子的结构与功能 ．．10 1．5 DNA与蛋白之间的相互作用 ．．11 1．5．1凝胶阻滞(EMSA) 12 1．5．2 DNaseI足迹 一12 1．6研究的目的和意义 12 2材料与方法 一1 3 2．1材料 ．13 2．1．1质粒和菌株 13 2．1．2植物材料 14 2．1．3分子生物学和植物转化相关试剂 1 5 2．1．4基本分子生物学操作方法 ．15 2．1．2主要培养基 ．1 5 2．2方法 ．17 万方数据 华中农业大学2015届硕士研究生学位论文2．2．1酵母双杂交验证蛋白相互作用 华中农业大学2015届硕士研究生学位论文 2．2．1酵母双杂交验证蛋白相互作用 ．1 7 2．2．2双分子荧光互补(BiFC)分析 20 2。2．3多分子荧光互补(meBiFC)分析 ．．2l 2．2．4毛根转化和鉴定 ．2 1 2．2．5凝胶阻滞实验(EMSA) ．22 3结果与分析 30 3．1MtIPN2和MtlLK蛋白和基因的结构特性 ．30 3．2 MtIPN2和MtlLK与MtNSP2蛋白在酵母体内的相互作用 33 3．3 MtNSP2和MtIPN2或MtILK与在植物细胞中相互作用 35 3．3．1双分子荧光互补(BiFC)验证MtIPN2和MtlLK与MtNSP2的 相互作用 ．．35 3．3．2多分子荧光互补(mcBiFC)验证MtlPN2和MtlLK与MtNSP2 的相互作用 ～37 3．4 MtlPN2和MtlLK的亚细胞定位 39 3．5体外LjIPN2和LjNSPl与NIN启动子结合 一41 4讨论、总结及展望 ．．43 4．1总结 ．43 4．2讨论 44 4．3展望 46 参考文献 ．．47 附录：本试验所用引物 ．．55 致{射 一56 II 万方数据 豆科植物中结瘤信号通路蛋白NSP2相互作用蛋白IPN2的功能分析摘 豆科植物中结瘤信号通路蛋白NSP2相互作用蛋白IP