陡脉冲不可逆电穿孔技术治疗肺部肿瘤的参数筛选、作用机制和动物研究-临床医学;外科学胸心外次科学专业毕业论文.pdf.docxVIP

天津医科人学}尊+学位论文陡脉冲不可逆电穿孔技术治疗肺部肿瘤的参数 天津医科人学}尊+学位论文 陡脉冲不可逆电穿孔技术治疗肺部肿瘤的参数 筛选、作用机制和动物研究：tc 中文摘要 最新研究表明，陡脉冲技术杀灭肿瘤细胞的机制为高能脉冲电场使肿瘤细 胞发生不可逆性电穿孔，从而导致肿瘤细胞的直接死亡，其独特的生物电效应 在肿瘤的综合治疗中展示出良好的发展前景。但陡脉冲不可逆电穿孔技术作用 于肺癌的研究尚未见报道。本课题第一部分拟首先验证陡脉冲不可逆电穿孔技 术作用于大细胞肺癌细胞株L9981的有效性，然后在此基础上筛选出陡脉冲不可 逆电穿孔技术对大细胞肺癌细胞株L9981的最佳治疗参数；本课题的第二部分通 过筛选出的最佳治疗参数作用于大细胞肺癌细胞株L9981后的分子生物学改变， 从细胞水平研究其可能的作用机制；本课题的第三部分通过陡脉冲不可逆电穿 孔技术作用于裸鼠大细胞肺癌细胞株I。9981皮下移植瘤模型的效果，筛选出对大 细胞肺癌细胞株L9981皮下移植瘤的最佳治疗参数，并在组织水平上研究其作用 机制；通过以上的研究，为今后陡脉冲不可逆电穿孔技术应用于肺癌的临床治 疗提供理论及实验依据。 第一部分陡脉冲不可逆电穿孔技术作用于大细胞肺癌细胞 株L998 1的参数研究 目的：验证陡脉冲不可逆电穿孔技术对大细胞肺癌细胞株L998 1的有效性，并筛 选其对大细胞肺癌细胞株L9981最佳的治疗参数。方法：通过设置不同的3组陡 脉冲治疗参数，作用于肺癌细胞株L9981后，应用Vi—Cell细胞活力分析、MTT， 检测L998l细胞的死亡率、细胞抑制率以及细胞增殖能力。结果：陡脉冲不可逆 电穿孔技术对大细胞肺癌细胞株L9981具有较好的杀灭作用，不同的陡脉冲治疗 参数下有差异。结论：陡脉冲不可逆电穿孔技术对大细胞肺癌细胞株L9981有较 +好的杀灭作用，电压幅值2000V／em，脉冲宽度100us，脉冲频率1Hz，脉冲个数 10个，重复次数6次对肺癌细胞株L9981为最佳的治疗参数，在这组参数下，能 ’本课题享受围家自然科学基金重点项目(No、国家自然科学幕金项目(No、国 家“863”重人项目(No。2006AAOZA401)、国家“973”重人项日(No．2010cB529405)、天津市科技支撑 计划重点项日(No．06YFSZF05300)、天津市创新体系建设项目(No．07SYSYSF05000)资助和中瑞合作重大 项目(No．09ZCZDSF04100)资助。 一I． 天津医科人学『尊十学位论文最大程度杀灭肿瘤细胞。 天津医科人学『尊十学位论文 最大程度杀灭肿瘤细胞。 第二部分陡脉冲不可逆电穿孑L技术杀灭大细胞肺癌细胞株 L998l的作用机制研究 目的：研究陡脉冲不可逆电穿孔技术杀灭大肺癌细胞株L998l的作用机制。方法： 通过陡脉冲作用于大细胞肺癌细胞株L9981后，应用细胞凋亡检测、细胞线粒体 膜电位检测、细胞内PH值变化的检测以及细胞内游离钙离子浓度检测，探讨陡 脉冲的可能作用机制。结果：细胞凋亡检测结果表明，经陡脉冲电处理的L9981 细胞主要经历坏死和凋亡，随着电参数的增大，坏死细胞的比例迅速增加；细 胞线粒体膜电位检测表明，陡脉冲作用下，细胞线粒体膜电位发生去极化，导 致细胞死亡和凋亡；细胞内PH值变化的检测表明，陡脉冲作用下，细胞内的PH 值发生了级跃式的下降，越来越向酸性变化，导致细胞死亡；细胞内C∥+浓度检 测表明，陡脉冲作用下，细胞I大jCa2+数明显增多，导致细胞的死亡和凋亡。结论： 陡脉冲通过细胞的凋亡而导致肿瘤细胞的死亡，从而杀灭川n,-h，,·d田a细胞。 第三部分 陡脉冲不可逆电穿孑L技术作用于裸鼠皮下移植 瘤模型的参数选择及作用机制研究 目的：研究不同参数下陡脉冲不可逆电穿孔技术作用于大细胞肿癌细胞株L9981 裸鼠皮下移植瘤模型，筛选陡脉冲作用于裸鼠皮下移植瘤模型的最佳参数，并 在组织水平上探讨其作用机制。方法：通过设置3组不同的陡脉冲治疗参数，作 用于裸鼠皮下移植瘤模型后，应用活体动物成像系统，观察不同参数下的抑瘤 效果，光镜下观察陡脉冲作用下组织病理学改变，免疫荧光检；澳qCaspase-3蛋白 表达。结果：活体动物成像系统检查表明，陡脉冲对裸鼠皮下移植瘤具有明显 的抑瘤效果，病理学观察肿瘤组织发生了坏死和凋亡，Caspase一3蛋白表达较正 常组织表达增高。结论：陡脉冲不可逆电穿孔技术对大细胞肺癌细胞株L9981裸 鼠皮下移植瘤模型有较好的抑瘤效应；应用夹板式电极，电压幅值2000V／ern， 脉冲宽度100us，脉冲频率1Hz，脉冲个数60个，重复次数3次对移植瘤模型有最 佳的抑瘤效果；陡脉冲引起肿瘤组织的凝固性坏死，可能通过诱导肿瘤细胞的 凋亡引