外植体的选择与培.pptVIP

第三节 外植体的选择与培养 二、外植体灭菌 1：对材料进行预处理 2：材料表面灭菌： 1）水洗,滤纸吸干; 2)70%酒精浸30～60s; 3）用灭菌剂处理; 4）用无菌水冲洗. 三、外植体的接种与培养 （一）接种—无菌操作 定义:把经表面灭菌处理后植物材料，切碎或分离出器官、组织、细胞，再经无菌操作转接到无菌培养基上，这一过程叫做接种。 (1)在接种前1-2周用甲醛熏蒸接种室； (2)接种前15-20min，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯； (3)接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，及拖鞋等； (4)上工作台后，用酒精棉球擦拭双手。然后70%酒精喷雾降尘，并擦拭工作台面； (5)先用酒精棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪子蘸95%酒精在酒精灯火焰上灼烧，放置冷却。 接种时的无菌操作技术： (1)对接种材料进行消毒； (2)先解开包口纸，将试管等拿成斜角，使试管口在酒精火焰上方转动，灼烧数秒钟； (3)用灼烧过的镊子夹取外植体送入试管内，轻轻插入或放在培养基表面； (4)接种完后，将管口在火焰上再灼烧数秒钟； (5)接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等； (6)接种工具随时蘸95%酒精灼烧，避免交叉污染； (7)接种完毕后要清理干净并用70%酒精擦工作台。 （二） 外植体培养 外植体培养：指把培养材料放在培养室里，使之生长，分裂和分化形成愈伤组织或进一