甘草素诱导人肝癌smmc7721细胞凋亡及八其机制的研究.docxVIP

南索嚣科大学硕士学位论文甘草素诱导人肝癌SMMC．7721细胞凋亡及其机制的研究 南索嚣科大学硕士学位论文 甘草素诱导人肝癌SMMC．7721细胞凋亡及其机制的研究 研究生 张世蒴 指导老师 蔡云清 指导小组 王守林李爱萍 南京医科大学公共卫生学院，南京，210029 中文摘要 肝癌是临床上常见的消化系统恶性肿瘤之一，在世界范围内，其 发病率呈现上升的趋势。肝癌的发生不仅与细胞的异常增殖有关，亦 与细胞凋亡的失衡存在密切关系。大量研究发现黄酮类化合物具有抗 肿瘤的作用，其机制主要是遗过抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡和干预 细胞信号转导途径中的蛋白激酶等[11。甘草素是一种从甘草中提取的 一种二氢黄酮单体化合物。国内外研究报道甘草素具有多种生理活性 作用，但有关甘草素抗肿瘤作用的研究报道甚少。因此，本课题拟观 察甘草素对肿瘤细胞增殖的影响及诱导肿瘤细胞凋亡作用，并通过检 测凋亡相关蛋白与酶活性的变化深入探讨甘草素诱导人肝癌 SMMC．7721细胞凋亡的分子机理，为进一步研究甘草素的抗肿瘤作 用机制提供科学依据。 4 南衷医科大学顼士学位论文第一部分甘草素抑制肿瘤细胞生长及诱导人肝癌SMMC．7721细 南衷医科大学顼士学位论文 第一部分甘草素抑制肿瘤细胞生长及诱导人肝癌SMMC．7721细 胞凋亡的研究 目的：探讨甘草素(1iquiritigenin)对两株肿瘤细胞生长的抑制作用及对 人肝癌SMMC。7721胞凋亡的诱导作用的影响。方法：本研究采用体 外培养人结肠癌Lovo细胞和人肝癌SMMC．7721细胞的方法，通过噻 唑蓝(MTT)≥g色法观察甘草素对肿瘤细胞增殖的影响；Hoechst染色法 和电镜观察甘草素诱导SMMC一7721细胞凋亡的形态变化：流式细胞 仪检测甘草素诱导SMMC．7721细胞凋亡率的变化情况。结果：甘草 素对Lovo结肠癌细胞作用24、48和72h时各剂量组出现生长抑制作用， 其最高抑制率分别为15．4％、57．1％和84．7％；对SMMC．7721肝癌细 胞作用24、48和72h时，各剂量组都已出现生长抑制作用，最高抑制 率分别达到85。6％、94．2％和91．3％，并呈现明显的剂量一效应关系。 甘草素0。4mM作用SMMC．7721细胞12、24、48争72h，Hoechst染色 观察可见细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染；透射电镜观察可 见0．4mM甘草素作用细胞72惦，细胞染色质浓缩、空泡。流式细胞 仪检测结果发现，甘草素可诱导SMMC．7721细胞凋亡，并呈时间一剂 量效应关系，甘草素剂量no．6mM作用24垢，即可引抛3．52％的细 胞发生凋亡。结论：甘草素对人结肠癌Lovo细胞和人肝癌SMMC．7721 细胞的生长均有抑制作用，其中对SMMC。7721肝癌细胞的生长抑制 作用更加明显，并能诱导SMMC。7721肝癌细胞细胞凋亡。 关键期甘草素；沁法；生长抑制；Hoechst染色；电镜；人肝癌 SMMC一7721细胞；细胞凋亡 鬻索医科大学硕士学位论文第二部分研究甘草素诱导人肝癌SMMC．7721．细胞凋亡的氧化机制 鬻索医科大学硕士学位论文 第二部分研究甘草素诱导人肝癌SMMC．7721．细胞凋亡的氧化机制 阁的：探讨甘草素诱导X．SMMC．7721肝癌细胞凋亡作用的氧化机制。 方法：细胞经氧化敏感的荧光染料2，7一二氢二氯荧光素∞CFH)和罗 丹明123(RH-1231)染色后，用流式细胞仪分别测定细胞内氧化水平 (RoS)线粒体跨膜电位的变化；黄嘌呤氧化酶法测定sOD活褴，5’5’ 一二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)法测定GSH和GSH．PXS-舌性；通过免疫 印迹法测定凋亡相关蛋白(p53、Bcl．2和survivin)的表达水平，采用酶 标法检钡qcaspase．3酶的活性。结果：0．4raM甘草素作用SMMC．7721 细胞后出现ROS积聚，作用3h时，ROS已“现显著升高，并且呈现时 间效应关系，作用9h达到最高峰；预先ha／kNAC作用30min后再加入 甘草素，发现NAC*-]抑制细胞凋亡和细胞ROS的产生；同时，随着 作用时间的延长，线粒体膜电位不断下降，在作用9h和12h时出现显 著下降；细胞肉抗氧化酶SOD、GSH和GSH-PX：；@性均在甘草素作用 后出现持续下降；0．4mM甘草素作髑0、12、24、48和72骺，凋亡 相关蛋白p53和Bcl。2表迭水平分别呈时间依赖性上调和下调，survivin 蛋白和procaspase一3表达下调，caspase。3活性上升。结论：甘草素诱导 SMMC．7721肝癌细胞凋亡的机制可能与其促氧化机制有关。 关键词甘草素；ROS；线粒体膜电位；抗氧化酶；p．53蛋白；Bcl。2蛋 白；survivin蛋白；caspase一3酶；NA