细胞培养技术 教学课件 ppt 作者 兰容 周珍辉 主编 章静波 主审 实验部分1细胞培养的无菌操作.pptVIP

细胞培养的无菌操作 【培养前准备】 根据实验要求，准备各种所需器材和物品、清点无误后将其放置操作场所(培养室、超净台)内，然后开始消毒。这可以避免开始实验后．因物品不全往返拿取而增加污染机会。 【操作野消毒】 无菌培养室每天都要用0.2%的新洁尔灭拖洗地面—次(拖布要专用)．紫外线照射消毒30-50min，超净工作台台面每次实验前要用75％酒精擦洗。然后紫外线消毒30min。在工作台面消毒时切勿将培养细胞和培养用液同时照射紫外线，消毒时工作台面上用品不要过多或重叠放置．否则会遮挡射线降低消毒效果。—些操作用具如移液器、废液缸、污物盒、试管架等用75%酒精擦洗后置于台内同时紫外线消毒。 【洗手和着装】 原则上和外科手术相同。平时仅做观察不做培养操作时，可穿经细胞培养室内紫外线照射30min的清洁工作服。在利用超净台工作时，因整个前臂要伸入箱内，应着长袖的清洁工作服，并于开始操作前要用75％酒精消毒手。如果实验过程中手触及可能污染的物品和出入培养室都要重新用消毒液洗手。进入原代培养室需彻底洗手还要戴口罩、着消毒衣帽。 【火焰消毒】 一切操作，如按装吸管帽、打开或封闭瓶口等，都需在火焰近处并经过烧灼进行。 但要注意： 金属器械不能在为焰中烧的时间过长，以防退火，烧过的金属镊要待冷却后才能挟取组织，以免造成组织损伤。 吸取过营养液后的吸管不能再用火焰烧灼，因残留在吸管头中营养液能烧焦形成炭膜，再用时会把有害物带入营养液中。 开启、关闭长有细胞的培养瓶时，火焰灭菌时间要短。防止因温度过高烧死细胞。 胶塞过火焰时也不能时间长，以免烧焦产生有毒气体，危害培养细胞。 【操作】 动作要准确敏捷，但又不必太快。 不能用手触及已消毒器皿的使用端。 右手使用的东西放置在右侧，左手用品在左侧，酒精灯置于中央。 培养液在未用前，不要过早开瓶；用过之后如不再重复使用，应立即封闭瓶口。 吸取营养液、PBS、细胞悬液及其它各种用液时，均应分别使用吸管。 工作中不能面向操作野讲话或咳嗽手或相对较脏的物品不能经过开放的瓶口上方。 瓶口最易污染，加液时如吸管尖碰到瓶口，则应将吸管丢掉。 * * *