新编生物工艺学 教学课件 ppt 作者 俞俊棠 唐孝宣 邬行彦 李友荣 金青萍 编第二章 菌种选育.pptxVIP

新编生物工艺学 2 菌种选育2 菌种选育1菌种的来源2菌种选育2.1.1 生物物质产生菌的筛选2.1.1.1 微生物— 生物产物的来源不管过去、现在和将来，微生物是各种生物活性产物的丰富资源。关键是：①生物产物的来源— — —微生物的选择②采用什么样的筛选方案 （ 检测系统）2.1.1 生物物质产生菌的筛选2.1.1.2 待筛选样品的性质寻找新产物的产生菌可用固体或液体培养基筛选。但次级代谢物的大规模生产是用沉没培养法进行的，由于在固体培养基和液体培养基中产生的次级代谢物的方式不一样，因此有些厂家以液体培养法为惟一的筛选手段。2.1.1 生物物质产生菌的筛选2.1.1.3 筛选方案的设计基本上可利用以下三种不同的筛选方法：①整体生物②完整细胞③亚细胞制剂2.1.2 微生物选择性分离的原理和发展选择性分离方法大致可分为五个步骤：①含微生物材料的选择生产工人辅助工资②材料的预处理生产工人劳动保护费③所需菌种的分离④菌种的培养⑤菌种的选择和纯化2.1.2 微生物选择性分离的原理和发展含微生物材料的选择1材料的预处理2所需菌种的分离3菌种的培养4所需菌种的分离52.1.2.1 含微生物材料的选择2.1.2.2 材料的预处理2.1.2.3 所需菌种的分离2.1.2.3 所需菌种的分离在分离培养基中加入抗生素来增加选择性是广泛采用的一种方法（见表2-4）2.1.2.4 菌种的培养由于放线菌分离平板通常在２５～３０℃培养，嗜热菌的培养温度为4５～５５℃，而嗜冷菌的培养温度则为４～１０℃，故培养的主要变量为培养时间。分离嗜温菌如链霉菌和小单孢菌一般培养７～1４天；嗜热菌如高温放线菌只需１～２天。2.1.2.5 菌落的选择菌落的选择常常是分离步骤中最易受挫折和最耗时间的阶段。采用怎样的选择菌落方式取决于筛选的最终目的。常用以下两种筛选方法（1）铺菌法 于分离平板上铺一层单一的试验菌的办法可用来测定各个菌落的抗生素生产能力。（2）复印平板法 将菌落复印在平板上的办法来研究它们对一系列试验菌的作用。2.1.3 重要工业微生物的分离筛选具有潜在工业应用价值的微生物的第一个阶段是分离，分离是指获得纯的或混合的培养物。在筛选所需菌株时宜考虑的一些重要指标：①菌的营养特征②菌的生长温度应选择温度高于40℃的菌种。这样可以大大降低大规模发酵的冷却成本。因此用这一温度来分离培养高温产生菌在经济上是有利的。2.1.3 重要工业微生物的分离③菌对所采用的设备和生产过程的适应性。④菌的稳定性。⑤菌的产物得率和产物在培养液中的浓度。⑥容易从培养液中回收产物。③ ～⑥是用来衡量分离得到的菌种的生产性能，筛选出的菌种如能满足这几条便有希望成为效益高的生产菌种。2.1.3 重要工业微生物的分离2.1.3.1 施加选择压力的分离方法（1）富集液体培养 富集液体培养是指能增加混合菌群中所需菌株的数量的一种技术。用连续培养，通过改变限制性基质浓度可以控制两种菌的比生长速率，如图2-1所示2.1.3 重要工业微生物的分离（2）固体培养基的使用 固体培养基常用于分离某些酶产生菌，其选择培养基中常含有所需的基质，以便促使酶产生菌的生长。有人用这种方法分离产生碱性蛋白酶的芽孢杆菌属。2.1.3 重要工业微生物的分离2.1.3.2 随机分离方法有些微生物的产物对产生菌的筛选没有任何选择性优势可以用来开拓一种新的分离方法。①制备一系列的培养基，其中有各种类型的养分成为生长限制因素②使用一聚合或复合形式的生长限制养分③避免使用容易同化的碳，因为它们可能引起分解代谢阻遏2.1.3 重要工业微生物的分离④确定含有所需的辅因子⑤加入缓冲液以减少PH变化（1）抗生素产生菌筛选让潜在的产生菌生长在含有试验菌的平板上可以鉴定产生菌的抗微生物作用。也可以将微生物分离株生长在液体培养基中，检测其无细胞滤液的抗菌活性。2.1.3 重要工业微生物的分离法（2）药理活性化合物的筛选筛选能抑制人们代谢某一个关键酶的微生物产物的原理是一种化合物，例如在体外抑制一关键人体酶，它可以在体内具有药理作用。表２-５列出基于酶靶方法的药理筛选例子2.1.3 重要工业微生物的分离法2.1.3 重要工业微生物的分离法（3）生长因子产生菌的筛选 生长因子如氨基酸和核苷酸的生产不能作为分离步骤中的选择压力，可用随机办法分离产生菌，并通过随后的筛选试验检出产生菌。通过观察分离株能否促进营养缺陷型的生长，便可检出生长因子产生菌。2.1.3 重要工业微生物的分离法（4）多糖产生菌的筛选 经自然界分离、筛选获得的有价值的菌种，在用于工业生产之前必须经人工选育以得到具一定生产能力的菌种。特别是用于医药上的抗生素，还需通过一系列的安全试验及临床试验，以确定是否是一种有效而安全的新药。2.2 菌种的选育自然选育1诱变育种2抗噬菌体菌株的选育3杂交育种