生物化学与分子生物学八年制.pptVIP

3. 利用环状PCR钓取启动子 基因组DNA 酶切消化 基因组DNA片段 直接环化连接 加上接头后环化连接 根据基因上游序列设计一对反向互补引物 PCR扩增 根据接头序列设计引物 PCR扩增 克隆 测序分析 克隆 测序分析 加接头环化PCR不依赖特异基因序列 可用于筛选启动子 接头 （二）利用核酸-蛋白质互作方法研究启动子 启动子是一段能被蛋白质识别和结合的DNA序列，因此，能够检测核酸-蛋白质相互作用的研究方法都可以用于启动子的研究中 主要方法： 足迹法（酶足迹法，化学足迹法） 电泳迁移率变动实验（EMSA） 染色体免疫沉淀（ChIP） 1. 用足迹法研究启动子 足迹法（Footprinting） 利用DNA电泳条带连续性中断的图谱特点判断与蛋白质结合的DNA区域 基本流程： DNA与蛋白质相互作用 切割DNA 凝胶电泳 分析电泳图谱 蛋白与未标记的竞争DNA结合 蛋白与标记的DNA结合 凝胶电泳 放射自显影 （1）酶足迹法 (Enzymatic footprinting) 利用能切割DNA的酶处理DNA-蛋白质混合物，然后通过电泳进行分析 DNase I足迹法 (DNase I footprinting) 是一种利用DNase I 随机切割双链DNA，从而确定DNA结合蛋白在DNA上结合位点的方法 核酸外切酶III足迹法