凋亡研究进展及检测研究生的课件.ppt

TUNEL法：（原位凋亡检测试剂盒） 1）检测原理： 凋亡产生的断裂的DNA-----TdT酶标记dUTP-Biotin-----结合链霉亲和素-HRP-----作用于底物DAB显色 4、DNA Ladder 试剂盒 1）检测原理: DNA片段化 激活核酸内切酶 核小体连接区发生DNA降解， 寡核小体片段（160～200bp的倍数) 检测材料与方法: 细胞或新鲜组织，裂解——蛋白酶和RNA酶消化——提取DNA片段——琼脂糖电泳 检测结果: 琼脂糖电泳图片 碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）对细胞进行染色，凋亡细胞由于总DNA量降低，于正常G0/G1细胞群前出现一DNA低染细胞群，即G1峰前出现亚二倍体峰（sub-G1）即细胞凋亡群 5、DNA含量分析 DNA Damage 2N 4N 2N 4N G1 S G2/M 6、细胞凋亡的分子水平检测方法 1）Caspase分子的检测 2）线粒体膜势能的检测 JC-1 3）凋亡相关分子的检测 促凋亡分子 抑凋亡分子 4）相关信号通路分子的检测 1）Caspase分子的检测 Caspase3、8和9，2，6等 Caspase检测方法 ①分光光度法检测 ②FACS检测 ③Western Blot检测 全长检测 剪切体检测 3）凋亡相关分子的检测 促凋亡分子