实验一、16S rRNA基因的PCR扩增、电泳及系统发育分析.pptVIP

马玉超 北京林业大学生物科学与技术学院 办公地点：生物楼117；电话 Email:myc0307@;实 验 内 容;16S rRNA基因的PCR扩增、电泳 及系统发育分析 窦 桂 铭 ;实 验 目 的; PCR（Polymerase Chain Reaction）法，又称为聚合酶链反应或PCR扩增技术，是一种高效快速的体外DNA聚合程序;PCR技术的反应原理;;一个标准的PCR过程;核酸的凝胶电泳;二、琼脂糖凝胶电泳 琼脂糖：线性多糖聚合物、从红色海藻产物琼脂中提取而来。 加热→凝固：网孔状的电泳介质，密度由琼脂糖的浓度决定。;DNA分子在电泳过程中迁移的距离受以下几个因素的影响：;电泳指示剂：溴芬兰，距边缘1cm左右停止电泳。 电泳染色剂：溴化乙锭(ethidium bromide,简称EtBr)， 扁平染料， 嵌到DNA或RNA分子的碱基之间，借助紫外灯观察。;操 作 步 骤;循环次数;(1) 称取琼脂糖，用适当的电泳缓冲液(常用1×TAE)配成所需浓度的胶；10×TAE 缓冲液配制：0.4M Tris-乙酸；0.02M EDTA，pH8.0 (2) 置微波炉中加热煮沸，直至琼脂糖完全溶解； (3) 按照每20ml胶加入1μl Goldview/20ml； (4) 凝胶溶液冷却至50℃左右，倒入电泳胶盘，避免出现气泡，室温放置，至胶凝固； (5