引物扩增的特异性.ppt

* * 聚合酶链式反应(PCR)扩增DNA片段 实验目的和要求 学习和掌握PCR基因扩增的原理和操作方法，并深刻理解PCR基因扩增技术在DNA操作中的重要性。本实验以含有小鼠的基因（暂定T10）的质粒pCMV-Myc-T10为模板，扩增出约800bp的产物。 1) 多聚酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR )：是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的方法。 1985年 Kary Mullis及同事创立。随后借助于热稳定性Taq DNA聚合酶的发现（1976年Chien等分离的热稳定性Taq DNA聚合酶），使PCR自动化成为可能；1987年Kary Mullis等完成了自动化操作装置，使PCR技术进行实用阶段。1993年度，Kary Mullis因发明了“聚合酶链式反应”而获得诺贝尔化学奖。 2. 相关基础知识 PCR 的特点及应用： PCR操作简便、省时、灵敏度高、对原始材料的质和量要求低。因此，广泛应用于许多领域。 基因克隆及定量、扩增特异性片段用于探针、体外获得突变体、提供大量DNA用于测序等； 遗传病的产前诊断； 致病病原体的检测； 癌基因的检测和诊断；　　 DNA指纹、个体识别、亲子关系鉴别及法医物证； 动、植物检疫； 在转基因动植物中检查植入基因的存在。 原理类似于DNA的变性和复性过程，即在高温（93-95℃）下，待扩