DNA重组技术的基本过程.pptVIP

第一章 DNA重组技术;第一节 概 述;;一.现代科学技术发展的特点 (二)科学技术发展的综合化 1.19世纪中叶，科学和技术是二者分离的，它们各有独自文化传统，它们的发展往往是脱节的。 2.科学回答“是什么”“为什么”，技术回答“做什么”“怎么做”。当今科技发展已经密不可分，科学里包含技术，技术里体现科学。 3.当代科技发展有两种形式：一是突破，二是融合。突破是线性的，即从研究开发新一代的科技成果取代原有一代科技成果。融合是非线性的，即混合原有不同的科技领域，进而发展新产品，造成革命性市场，它们是互补和合作的结果。;二．基因工程的概念 （一）基因（gene）：从化学上来说，指的是一段DNA或RNA顺序，该顺序可以产生或影响某种表型（genotype，phenotype），可以由于突变生成等位基因变异体（体细胞父源和母源；正常和突变基因）；从遗传学上来说，基因代表一个遗传单位，一个功能单位，一个突变单位。 （二）基因工程（genetic engineering）：在体外通过人工剪、接，将不同来源的DNA分子组成一个杂合DNA分子(DNA分子重组体)，然后导入宿主细胞去复制扩增或表达。因为通过人工设计,得到一定的设计方案，故称为基因工程。由于整个操作在分子水平上进行，所以也称分子克隆。;二．基因工程的概念 1.“基因剪刀” ：剪取DNA的酶就像一把“基因剪刀”。 2.“缝纫针” ：连接不同来源DNA分子的酶就像一根“缝纫针”，使二者连在一起。 3.“交通工具”：使用载体好比一辆车子。 4.“乘客”：有用基因如IL2好比使乘客，车子把乘客送进宿主细胞中去繁衍生息，生产我们需要的产品或开展基因治疗（IL2/LAK→抗癌）。; 我们应该记住他们—— 1.第一个实现DNA重组的人－Berg 1972年，Berg用E.coRⅠ切割SV40DNA和λ phageDNA，经过连接组成重组的DNA分子。Berg是第一个实现DNA重组的人。 ; 我们应该记住他们—— 2.第一个取得基因工程成功的人－Cohen 1973年，Cohen Group将E. coli 的tetr质粒psclol和nersrR6-3质粒体外限制酶切割，连接成一个新的质粒，转化E. coli，在含四环素和新霉素的平板上筛选出了terrNer，实现了细菌遗传性状的转移。这是基因工程史上的第一个克隆化并取得成功的例子，这一年被定为基因工程诞生的元年。;三．基因工程克隆技术――人类对自然的干预 （一）“多利”羊的诞生;维尔穆特和克隆羊“多利”在一起;（二）胚胎细胞克隆和体细胞克隆的比较 ? 项目 胚胎细胞克隆 体 细 胞 克 隆 供体细胞 胚胎细胞（核） 体细胞（核） 受体细胞 去核未受精的卵细胞 去核未受精的卵细胞 发育场所 母体宫腔 母体宫腔 关键区别 克隆的是子代（多生了一个） 复制的是自己（复制了一个） （三）克隆技术是一把双刃剑;用克隆技术复制人类的假想图;四．基因工程三大理论，三大技术准备 （一）理论上的三大发现 1. 20世纪40年代，Avery发现了生物遗传物质的化学本质是DNA。超越时代的科学成就往往不易被人们接受，Avery当时并未赢得阵阵掌声，他的论文事隔10年以后才公开发表。 2. 20世纪50年代，Watson-crick提出了DNA结构的双螺旋结构模型，搞清楚了生物遗传物质的分子机制。 3. 20世纪60年代，确定了遗传信息的传递方式：DNA→RNA→Pr,破译了全部遗传密码，43。;（二） 技术上的三大发明 1．“基因剪刀”－限制性内切酶的发明 1970年，Smith和Wilcox在流感嗜血杆菌（Haemophilus inffuenzae）分离纯化了HindⅡ，取得了突破，打破了基因工程的禁锢，迎来了改造生物的春天，为基因工程奠定了最为重要的技术基础。 2．载体(“交通工具车子”) 直到1973年Cohen才能将质粒作为基因工程载体使用（至今一直是基因工程最重要最广泛使用的载体）。这是基因工程的第二个技术准备。;（二） 技术上的三大发明 3．逆转录酶 1970年Baltimove和Temin等同时各自发现了逆转录酶，打破了遗传学（生物学）中心法则，使真核基因的制备成为可能。 真核基因组庞大而复杂，不易制得基因图谱。即使有了基因图谱