无机磷与有机磷不同配比对铜绿微囊藻生长及摄磷效应研究.doc

无机磷与有机磷不同配比对铜绿微囊藻生长及摄磷效应研究 丁 飞 飞，黄鹤忠*，陈金凤，徐汗福，范皖苏，何华敏 （苏州大学医学部基础医学与生物科学学院，苏州大学水产研究所 江苏 苏州215123） 摘要：在实验室条件下研究了无机磷(磷酸氢二钾) 与两种有机磷(β—甘油磷酸钠、三磷酸腺苷钠)不同配比对铜绿微囊藻的生长效应以及微囊藻摄取不同磷形态[总溶解磷(total dissolved phosphorus, TSP)、溶解反应磷(Soluble Reactive Phosphorus, SRP)和溶解有机磷(dissolved organic phosphorus, DOP)]的规律。结果表明：当无机磷与有机磷配比为6:1时，对铜绿微囊藻生长最有利，对数生长期可维持6—8d，其最大生物量达2.586×106ind·ml-1；培养基中以有机磷作为唯一磷源时，铜绿微囊藻的生长最差；两种有机磷(β—甘油磷酸钠、三磷酸腺苷钠)对铜绿微囊藻生长的效果相似，铜绿微囊藻对SRP的摄取速度越快，其生长速率也越高(相关系数R为0.9995)；待水中可利用磷耗尽后，β—甘油磷酸钠会在碱性磷酸酶作用下转化成可利用磷供藻生长，而三磷酸腺苷可直接分解成磷酸基供铜绿微囊藻生长。 关键词：铜绿微囊藻；有机磷；无机磷；生长；摄磷 中国分类号： 文献标志码： A 文章编号： 在我国大部分富营养化水体中，铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)在数量和发生频率上均占优势(Lu Yuan等，2001；金相灿，1995)，铜绿微囊藻死亡或细胞膜通透性增强时会向水中释放微囊藻毒素，对环境和人类健康造成危害。关于造成湖泊富营养化的营养物质基础问题，一致的观点认为主要物质是氮和磷，其中磷对藻类的生长限制作用又大于氮(Vollenweider R等，1982；高学庆，1994)。在自然水体中除了存在无机的正磷酸盐外，还有大量的溶解有机磷；甚至在某些季节，溶解有机磷常常会成为某些海域磷的主要形态(陈水土，1993；陈洪涛等，1992)。因此，在探讨磷对铜绿微囊藻生长影响的研究中，仅考虑某种单一磷形态的影响是不够的，全面考虑多种磷形态的综合作用十分必要。虽然国内外研究者围绕铜绿微囊藻的生长代谢做了大量工作(Takamura N T Iwkume等，1985；Barns R S K等，1980；Chu S P，1942)，但有关无机磷与有机磷不同配比对铜绿微囊藻生长及摄磷特性的研究未见报道，本研究旨在探讨铜绿微囊藻对水体不同磷形态吸收利用和生长的影响，从而为通过水体不同磷形态的变化来预测和防止铜绿微囊藻的暴发提供理论依据。 材料与方法 1.1 藻种及培养 铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)由苏州大学生命科学学院提供。采用BG-11培养基(钱芸等，2003)，培养温度28±1℃，Ph8，光照强度3000Lux，光暗比12L:12D，每5d转接1次，重复2次，所得微囊藻浓度经镜检计数超过106ind·ml-1时，取处于对数生长期的藻液于5000r/min离心15min，用去离子水反复冲洗3次以除去表面吸附的磷，再将藻种转入无磷BG-11培养液中饥饿培养，3d后用于试验。然后接入已灭菌的培养液中，使得试验起始藻密度为5.0 ×104mL 收稿日期： 收稿日期： 基金项目：江苏省社会发展资助项目(BS2002016) 作者简介：丁飞飞(1984-)，女，山西晋城人，硕士研究生， 主要从事水生生物和环境保护学研究; 黄鹤忠，通讯作者，副教授，硕士生导师，电话：0512E-mail: suda-shui@163.com 1.2 试验方法 1.2.1 试验设置 以磷酸氢二钾、β—甘油磷酸钠和三磷酸腺苷(ATP)钠为磷源，参考湖泊水质中有机磷与无机磷的配比状况分别确定9个浓度配比梯度组，即：K2HPO4:β—甘油磷酸钠和K2HPO4:三磷酸腺苷钠均分别为1:0、36:1、12:1、6:1、1:1、1:6、1:12、1:36、0:1，每组设2个平行。以上各组磷的总浓度为1mg·L-1，氮以硝酸钠的形式添加，浓度为1.5mg·L-1，其余营养元素均按BG-II培养基的配方添加，均在实验开始时一次性添加。实验开始后，每天定时取样统计各组藻密度，隔三天取样测定培养液及藻体内磷含量，取平均值并标准差，来分析藻体在不同供磷情况下的生长和摄磷特性。 1.2.2 藻液按一定的稀释倍数逐级进行稀释后用浮游生物计数框精确计数，并用721型分光光度计在625nm下测其吸光度值，以细胞个数对吸光度绘制标准曲线。得到标准曲线为：Y=0.015+236.24X。其中，Y为藻细