影响酶活力的因素.docVIP

酶作用的动力学观察 ? 一、目的和要求 1．了解温度，PH值对酶活性的影响。 2．了解酶促反应的激活与抑制 二、实验原理 酶，有的是单纯蛋白质，有的是结合蛋白质，因此，凡是能够引起蛋白质变性的因素，都可以使酶丧失活性，温度，PH值，激活剂和抑制剂对酶的活性都有显著的影响。酶活性通常是通过测定酶促反应的底物或产物量的变化来进行观察。 本实验用唾液淀粉酶为材料来观察酶活性受理化因素影响的情况。淀粉在该酶的催化作用下会随着时间的延长而出现不同程度的水解，从而得到各种糊精乃至麦芽糖、少量葡萄糖等水解产物。碘液能指示淀粉的水解程度： ? 淀粉 ?糊精 ?麦芽糖 + 少量葡萄糖 加碘后：?? ??蓝色? ???紫红色、暗褐色或红色等?? ???棕黄色（碘本身颜色） 淀粉遇碘可呈紫色、暗褐色与红色，而麦芽糖与葡萄糖遇碘则不呈颜色反应，仅显示碘液的原色。 ?1．温度对酶活性的影响 酶的催化作用受温度的影响很大，一方面与一般化学反应一样，酶促反应速度随着温度的升高而增大。当温度升高到一定程度时，酶促反应的速度达到最大值。此时的温度称为该酶的最适温度。另一方面酶是一种蛋白质，温度过高会引起蛋白质变性，导致酶的失活，因此，反应速度达到最大值以后，随着温度的升高，反应速度反而逐渐下降，以至完全停止反应。 2．PH值对酶活性的影响 酶的活性受环境PH的影响极为显著。通常酶只有在一定的PH范围内才表现活性，一种酶表现活性最强时的PH值，称为该酶的最适PH，偏离最适PH时酶的活性逐渐降低，偏离越远，其活性越低，不同的酶最适PH不同，例如，胃蛋白酶的最适PH为1。25－2。5，淀粉酶的最适PH为6。8，但是酶的最适PH还受底物性质和缓冲液性质的影响，在磷酸缓冲液中，淀粉酶的最适PH为6。4－6。6。 3．酶的激活剂和抑制剂 酶的活性受某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为酶的激活剂；有些物质能使酶的活性降低，称为酶的抑制剂，例如，氯化钠为唾液淀粉酶的激活剂，硫酸铜为抑制剂，激活剂和抑制剂通常是具有特异性的。 ? 三、试剂和器材 ? 1．试剂 （1）1％淀粉溶液 （2）PH5。0、5。8、6。6、7。4、8。0的磷酸氢二钠一—柠檬酸缓冲液。 （3）自制唾液淀粉酶（见实验一） （4）碘化钾―碘液：将碘化钾20克及碘10克溶于100毫升蒸馏水中，用时稀释10倍。 （5）1％氯化钠溶液 （6）2％硫酸铜溶液 2．器材（同实验一）。 ? 四．操作方法 1．温度对唾液淀粉酶活性的影响 取三支试管，编号，按下表操作 ?????????????????????? 试管号 试剂 1 2 3 1％淀粉溶液（滴） 5 5 5 PH6.6缓冲液（滴） 10 10 10 自制唾液淀粉酶溶液（滴） 5 5 ／ 煮沸过的唾液淀粉酶溶液（滴） ／ ／ 5 混匀，1号管放入冰水中，2，3号管放置37℃ 2．PH值对唾液淀粉酶活性的影响 取5支试管，编号，按下表操作。 试管 试剂 1 2 3 4 5 1％淀粉溶液（滴） 5 5 5 5 5 缓冲液（滴） PH5.0 10 PH5.8 10 PH6.6 10 PH7.4 10 PH8.0 10 自制唾液淀粉酶溶液（滴） 5 5 5 5 5 混匀，置37℃水浴箱中保温，10分钟后取出 碘试剂（滴） 1 1 1 1 1 摇匀，观察各管颜色有何不同，解释这种现象。 3．抑制剂和激活剂对唾液淀粉酶活性的影响 取三支试管，编号，按下表操作。 ????????????????????????? 试管 试剂 1 2 3 1％淀粉溶液（滴） ????? 5 ??? ??5 5 PH6.6缓冲液（滴） ????? 10 ????? 10 10 1％氯化钠溶液（滴） ????? 4 ??????? / / 2％硫酸铜溶液（滴） ????? / ??????? 4 / 自制唾液淀粉酶溶液（滴） ????? 5 ??????? 5 5 混匀，置37℃水浴箱中保温，10分钟后取出。 碘试剂（滴） ????? 1 ??????? 1 ??????? 1 摇匀，观察各管颜色有何不同，试说明原因。