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特异性抗体的制备 广州医学院第一附属医院检验科 廖伟娇 第一节免疫原的制备 一、颗粒性抗原的制备 1.细胞抗原的制备： A 新鲜血经无菌NS洗涤3次，取压积红细胞并配制成2~5%,直接进行注射免疫。 B 新鲜血+抗凝剂— 4℃保存4W,免疫前取适量抗凝绵羊血，按A处理。 C 新鲜血去除纤维蛋白原后按B处理。 2.细菌抗原的制备：取标准菌株，接种， H抗原:取有动力的菌株液,用0.3~0.5%甲醛处理。 O抗原：菌液于100℃2.5h, Vi抗原：杀菌后，加入1%的氯化钙溶液。 3.虫卵也可作为抗原，例如日本血吸虫卵悬液。 4.组织细胞粗抗原：所用的组织必须是新鲜或处理后低温(-40 ℃)保存的。器官或组织材料得到后立即去除表面的包膜或结缔组织及大血管，用无菌NS进行灌注、洗涤至没有残血、污物，在冷浴中将组织剪成小块后粉碎(匀浆)/消化。粉碎方法有两种，一是高速组织捣碎机法：将组织+NS装入捣碎机筒中，开机即可，注意要高速(1万rmp)，间断(每次30秒~1min)进行，时间过长会导致产热，破坏抗原。另一种是研磨法(有时加入洗过的海沙使研磨更有效)。匀浆液经2~3千rmp离心，沉淀中含大量的组织细胞和碎片，上清液可提取可溶性抗原。消化是用胃蛋白酶或胰酶，通过酶解将细胞间质消化，获得游离单个细胞。 二、可溶性抗原的制备 1.细