酵母工程菌表达的几丁质酶分离及酶学性质研究.docVIP

青岛农业大学 毕 业 论 文（设计） 题 目：酵母工程菌表达的几丁质酶分离纯化及酶学性质研究 姓 名： 李云翔 学 院： 生命科学学院 专 业： 生物科学专业 班 级： 07级2班 学 号： 指导教师： 咸洪泉 2011年 6 月 15 日 毕业论文（设计）诚信声明 本人声明：所呈交的毕业论文（设计）是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，论文中引用他人的文献、数据、图表、资料均已作明确标注，论文中的结论和成果为本人独立完成，真实可靠，不包含他人成果及已获得青岛农业大学或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 论文（设计）作者签名： 日期： 年 月 日 毕业论文（设计）版权使用授权书 本毕业论文（设计）作者同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文（设计）的复印件和电子版，允许论文（设计）被查阅和借阅。本人授权青岛农业大学可以将本毕业论文（设计）全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本毕业论文（设计）。本人离校后发表或使用该毕业论文（设计）或与该论文（设计）直接相关的学术论文或成果时，单位署名为青岛农业大学。 论文（设计）作者签名： 日期： 年 月 日 指 导 教 师 签 名： 日期： 年 月 日 目录 TOC \o 1-3 \h \z \u 4008 摘要 1 10747 Abstract. 2 26034 引言 3 32490 1 材料与方法 4 18647 1.1 实验材料 4 31302 1.1.1 供试菌株 4 2181 1.1.2 试剂 4 17811 1.1.3 培养基及有关溶液的配制 5 10430 1.1.4 主要仪器设备 7 31530 1.2 实验方法 7 28491 1.2.1 酵母工程菌的培养和几丁质酶的诱导分泌表达 7 29480 1.2.2 N-乙酰氨基葡萄糖（NAG）标准曲线的建立 7 8068 1.2.3 酵母工程菌产酶曲线的测定 8 10370 1.2.4 几丁质酶的分离纯化 8 387 1.2.5 几丁质酶的SDS检测 8 2 1.2.6 几丁质酶的酶学性质 9 30643 2 结果与分析 10 18435 2.1 N-乙酰氨基葡萄糖标准曲线 10 15902 2.2 酵母工程菌产酶曲线的测定 11 16155 2.3 几丁质酶的SDS检测 11 2281 2.4 几丁质酶反应的最适温度 12 8478 2.5 几丁质酶反应的最适pH值 13 9174 2.6 几丁质酶的热稳定性 13 29974 2.7 几丁质酶的pH稳定性 13 720 2.8 不同金属离子对酶活性的影响 14 27687 2.9 变性剂、蛋白抑制剂和有机溶剂对几丁质酶活性的影响 14 29634 2.10 几丁质酶底物特异性测定 15 24703 3 结论与讨论 15 25679 3.1 结论 15 15542 3.2 讨论 16 551 3.3 展望 17 5971 致谢 17 29442 参考文献 18 酵母工程菌表达的几丁质酶分离纯化及酶学性质研究 生物科学专业 李云翔 指导教师 咸洪泉 摘要： 本文转几丁质酶基因的酵母工程菌株GS-tachit1-K进行诱导分泌表达，分离纯化发酵液中的几丁质酶，测定它的酶学性质。结果表明该酶的最适反应温度为50 ℃，在35 ℃以下相对稳定，最适反应pH值为5.5，在pH 4.5-6.5之间稳定。Cu2+、Ag+、Hg2+ 和SDS对酶活性有明显的抑制作用，该酶能特异性降解胶体几丁质。本研究结果为该酶的研究和开发利用提供了科学依据。 关键词：酵