生物技术制药实验.PDFVIP

生物技术制药实验 （供生物工程和生物技术专业使用） 夏焕章 编写 沈阳药科大学 生物技术与生物制药教研室 2006 年6 月 生物秀-专心做生物 www . 目 录 实验一 细菌感受态的制备和质粒的转化 1） 实验二 碱变性法提取质粒DNA 5 ） 实验三 水平式琼脂糖凝胶电泳法检测DNA 10） 物 生 实验四 DNA 的限制性内切酶酶切 m 14） 做o c 心 . 实验五 DNA 的回收与连接 o 18） 专 o i - b 实验六 基因的 PCR 扩增 聚合酶链式反应） 23 ） b 秀w. 物 实验七 用温度敏感型启动子 达系统表达目的基因 29 ） 生 w w 实验八 基因组合生物合成新化合物 36 ） 生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区 1 实验一 细菌感受态的制备和质粒的转化 实验目的 通过实验学会感受态细胞的制备方法和DNA 转化的最基本操作，以及如何 提高转化效率的思路。本实验综合因素较多，难度较大，是分子生物学中的一 个很关键的实验手段。 实验原理 转化是指某一细胞系由于接受了外源DNA，而导致其原来的遗传性状发生 改变，这种遗传性状包括遗传型和表型的改变。 感受态是受体菌能接受外源DNA 能力的一种生理状态。用CaCl 处理细菌， 2 改变细胞膜的结构，使质粒DNA 能够穿过细菌细胞膜进入细胞。然后在选择性 培养基中培养转化处理过的细菌，转化成功的细菌可以在选择性培养基上生长 形成菌落。 本实验采用质粒pUC118 转化大肠杆菌DH-5 ，通过氨苄青霉素抗性筛选 转