水稻种子蛋白质含量的测定-Bio-protocol.pdf

/e1010164 DOI:10.21769/BioProtoc.1010164 水稻种子蛋白质含量的测定 Determination of Protein Content in Rice Grains 彭波，李一博* 作物遗传改良国家重点实验室，华中农业大学，武汉 *通讯作者邮箱：liyibo@ 引用格式：彭波, 李 一 博 . (2018). 水稻种子蛋白质含量的测定. Bio-101 e1010164. Doi: 10.21769/BioProtoc.1010164. How to cite: Peng, B. and Li, Y. B. (2018). Determination of protein content in rice grains. Bio- 101 e1010164. Doi: 10.21769/BioProtoc.1010164. (in Chinese) 实验原理：红外光(Infrared)分为近红外(780-2500 nm)、中红外(2,500-50,000 nm)和远 红外(50 ,000-106 nm)三部分。红外光的能量与分子振动能量相当可以反映出不同的官 能团、化学键等信息。分子中的原子以化学键连接,每一化学键都有其特定的振动频率 和振幅。当入射光与化学键振动频率不匹配时,没有能量吸收；当入射光能与化学键振动 频率相匹配时,匹配偶极分子特征频率的光被吸收,表现为振幅的增加。近红外光谱研究 有机分子中与氢相连化学键的振动吸收，近红外区是分子的合频和倍频吸收谱带，主要 用于定量分析和已知物质的判别。近红外谱区谱有不同级别的倍频谱带外还包含许多 不同形式组合的合频吸收，谱带复杂，信息丰富，难于用常规的方法解析图谱，需要具 有先进化学计量学手段的专用近红外软件(WinISI软件)支持。将样品的近红外扫描光谱 数据和准确的湿化学数据结合起来可以建立数学模型来预测未知样品已建立定标成分 的值。 实验目的：可以快速、准确测定水稻种子蛋白质含量，并且对分析的样品没有任何损 害，可直接同时进行分析测定多种成分(如蛋白质、淀粉、水份，氨基酸等)。 关键词：水稻，种子，蛋白质含量，测定 材料与试剂 1. 水稻种子 Copyright © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC. 1 /e1010164 DOI:10.21769/BioProtoc.1010164 仪器设备 1. 近红外快速分析仪Foss XDS Rapid Content Analyzer (Foss NIR Systems, Inc. Laurel, MD) 2. 稻谷垄谷机 (JLGJ4.5，台州市粮仪厂) 3. 静态圆杯 实验步骤 1. 用WinISI 软件建立定标方程并完善 1.1 在WinISI 主菜单中建立新项目。 1.2 使用.nir 格式的文件和View Modify Files 程序块进行查看及编辑样品编号， 添加及修改实验室标准数据，对光谱文件进行排序生成其它新文件用于不同目 的的评估和测试等操作，并且可以对定标方程进行调整。 1.3 使用.CAL 格式的文件和Plot Spectra Scores, Spectrum 应用程序观察每一 样品的吸收图谱，并对光谱进行数学处理和去散射处理。进而考察不同“数学处 理”技术对光谱的影响。 1.4 使用.CAL格式的文件和Make and Use Scores, Create Score File from Spectra File 应用程序对光谱文件进行聚类分析,确定那些样品与文件中其它样品的扫 描光谱在光谱统计上有显著区别，将光谱数据转化为主成分得分数据，最后评 估聚类分析结果。 1.5 使用.CAL 格式的文件和Make and Use Scores, Select Sample from Spectra File 程序，采用主成分分析 PCA 选项，挑选过程只利用光谱扫描数据