高效液相色谱HPLC简介.pptVIP

改变a的途径 改变固定相 改变流动相 改变温度 改变样品的本身性质 在反相HPLC中溶剂强度会随着水/有机流动相中的有机相增加而增加。 确定最佳的溶剂强度 “试-凑法”，即先用一种可能过强的流动相，在后面的实验中逐步减小溶剂强度以增加k’，当所有谱峰的k’介于1—20时，其流动相已经接近最佳了。 采用梯度洗脱的实验方法，即在20min内，高强度的溶剂的比例从5%增加到100%，找出在梯度洗脱期间，流出峰到达中点的时间tx(即流出的第一谱峰与最末谱峰之间的中心点)，然后用下式计算合适的流动相离开梯度混合器的时间tk=tx-2t0-tD. t0为死时间，tD为溶剂由梯度混合器流出，通过泵和所连管线到达柱子的时间 最佳溶剂强度时溶剂浓度%：=初始浓度（%）+tk/20[最终浓度-初始浓度] 柱类型与温度选择性的关系 . 柱类型不同，选择性也不一样，这与键和相有关。 温度的选择性，温度的变化会影响分离度。 色谱柱条件 流速适中，过高会降低塔板数。 当流动相粘度增加时，塔板数会降低， 对于反相体系，水的粘度较高意味着在高温时操作有利于最大限度的增大塔板数，在50度时较好。 其他因素 工作压力：低于150bar 操作时间：应尽可能短 峰高：只要检测灵敏度有限，需要窄而高的峰 溶剂应用：对日常工作、大量实验，每次进样少消耗流动相为好 液相色谱贮液器的使用及维护 常用